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原文传递一种碳量子点荧光免疫法快速检测丙烯酰胺的方法

专利名称：	一种碳量子点荧光免疫法快速检测丙烯酰胺的方法
摘要：	本发明属于荧光法快速检测技术领域，具体一种碳量子点荧光免疫法快速检测丙烯酰胺的方法；具体步骤为：首先合成碳量子点，然后将功能化修饰适于生物标记的纳米材料碳量子点与丙烯酰胺特异性抗体结合，制备碳量子点标记丙烯酰胺抗体，得到高效的量子点‑抗体偶联复合物作为检测荧光探针，建立一种快速简便的荧光免疫分析方法应用在食品生产加工过程中丙烯酰胺的检测，为食品安全提供有效保障；本发明利用富含碳元素的前体物质柠檬酸合成碳量子点，来源广泛、成本低廉，安全环保；本发明提供的检测方法是基于酶联免疫法抗原抗体的特异性结合的原理检测丙烯酰胺，特异性较强，灵敏度较高，相比传统的酶联免疫法，检测时间缩短，检测效率提高。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	江苏大学
发明人：	张灿;师晓漫;于欣欣
专利状态：	有效
申请日期：	2019-03-29T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-16T00:00:00+0800
申请号：	CN201910249240.8
公开号：	CN110018308A
分类号：	G01N33/58(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	212013 江苏省镇江市京口区学府路301号
主权项：	1.一种碳量子点荧光免疫法快速检测丙烯酰胺的方法，其特征在于，步骤如下： (1)合成碳量子点溶液； (2)取步骤(1)中得到的碳量子点溶液加入到的碳酸氢钠缓冲液中，搅拌，加入戊二醛溶液，搅拌，再加入的丙烯酰胺特异性抗体溶液，得到混合溶液，转移至冰浴中反应；然后加入硼氢化钠溶液，在冰浴条件下进行搅拌，然后于一定条件下静置后，再用磷酸盐缓冲液透析，得到碳量子点标记丙烯酰胺抗体溶液； (3)荧光免疫法检测丙烯酰胺； S1：取丙烯酰胺半抗原与鸡卵清蛋白混合反应，得到包被原溶液，然后用碳酸盐缓冲液将包被原溶液稀释至一定浓度，得到包被原溶液稀释液，然后加入96孔黑色荧光酶标板的孔中，静置； S2：将吐温20和磷酸盐缓冲液混合配置洗涤液，然后将洗涤液加入酶标仪全自动洗板机中，把S1中得到的96孔黑色荧光酶标板放在酶标仪全自动洗板机下重复洗板，洗板后将96孔黑色荧光酶标板孔中的溶液吸干； S3：将牛血清白蛋白溶解在磷酸盐缓冲液中配置溶液，得到封闭液，将封闭液加入到S2处理后的96孔黑色荧光酶标板孔中，于一定条件下进行静置，然后再次用酶标仪全自动洗板机进行洗板； S4：在经过S3处理后的96孔黑色荧光酶标板中的孔中加入丙烯酰胺半抗原溶液和步骤(2)得到的碳量子点标记丙烯酰胺抗体溶液，于一定条件下进行竞争反应，得到竞争溶液；在一定的激发波长和发射波长条件下，测定96孔黑色荧光酶标板各孔中竞争溶液的荧光强度； S5：分别以丙烯酰胺半抗原的的浓度为横坐标，以步骤S4得到的荧光强度的比值为纵坐标，建立荧光酶联免疫法检测丙烯酰胺的标准曲线；进而实现对待测样品中丙烯酰胺含量的检测。 2.根据权利要求1所述的碳量子点荧光免疫法快速检测丙烯酰胺的方法，其特征在于，步骤(2)中所述碳量子点溶液的浓度为100-200mg/mL；所述碳酸氢钠缓冲液的浓度为500mM，pH＝9.5；所述用戊二醛溶液的质量浓度为5％；所述硼氢化钠溶液浓度为20mg/mL；所述丙烯酰胺特异性抗体溶液的浓度为1-4mg/mL。 3.根据权利要求1所述的碳量子点荧光免疫法快速检测丙烯酰胺的方法，其特征在于，步骤(2)中所述碳量子点溶液、碳酸氢钠缓冲液、戊二醛溶液、丙烯酰胺特异性抗体溶液、硼氢化钠溶液的体积比为50-150：14-28:5-10：5-15:20-40。 4.根据权利要求1所述的碳量子点荧光免疫法快速检测丙烯酰胺的方法，其特征在于，步骤(2)中所述一定条件为4℃黑暗条件；所述静置时间为10-12h；所述用磷酸盐缓冲液的浓度为10mM，pH＝7.4，透析时间为24-36h；所述的浓缩的方法为超滤浓缩管离心法，离心条件为：温度4℃，转速8000-10000r/min，时间15-20min。 5.根据权利要求1所述的碳量子点荧光免疫法快速检测丙烯酰胺的方法，其特征在于，步骤(3)的S1中所述的丙烯酰胺半抗原与鸡卵清蛋白用量的摩尔比为40～62:1。 6.根据权利要求1所述的碳量子点荧光免疫法快速检测丙烯酰胺的方法，其特征在于，步骤(3)的S1中所述碳酸盐缓冲液的浓度为0.05mM，pH＝9.6；所述包被原溶液稀释至一定浓度为5-10mg/L；所述在96孔黑色荧光酶标板中每孔加入包被原溶液稀释液的用量为100-200uL；所述静置条件为4℃黑暗条件下存放10-12h。 7.根据权利要求1所述的碳量子点荧光免疫法快速检测丙烯酰胺的方法，其特征在于，步骤(3)的S2中所述的吐温20与磷酸盐缓冲液的体积比为0.5-1：1000；所述洗涤液加入酶标仪全自动洗板机中的用量为300～500mL。 8.根据权利要求1所述的碳量子点荧光免疫法快速检测丙烯酰胺的方法，其特征在于，步骤(3)的S3中所述的牛血清白蛋白与磷酸盐缓冲液的用量比为1-2g：100mL；所述在96孔黑色荧光酶标板孔中加入封闭液的体积为100-200uL；所述的一定条件为37℃黑暗条件；所述静置时间为1-2h。 9.根据权利要求1所述的碳量子点荧光免疫法快速检测丙烯酰胺的方法，其特征在于，步骤(3)的S4中所述的丙烯酰胺半抗原溶液浓度为0.00032mg/L～5mg/L；所述的丙烯酰胺半抗原溶液和碳量子点标记丙烯酰胺抗体溶液的体积比为1-2：2-3。 10.根据权利要求1所述的碳量子点荧光免疫法快速检测丙烯酰胺的方法，其特征在于，步骤(3)的S4中所述的一定条件为37℃黑暗条件；竞争反应的时间为1-2h；所述最大激发波长为350nm；最大发射波长为460nm。
所属类别：	发明专利