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原文传递一种基于纳米酶催化的食源性致病菌定量检测体系构造方法

专利名称：	一种基于纳米酶催化的食源性致病菌定量检测体系构造方法
摘要：	本发明公开了一种基于纳米酶催化的食源性致病菌定量检测体系构造方法，以食源性致病菌为研究对象，建立了一种可特异性识别某种食源性致病菌的定量检测体系。合成构建体系所需的纳米材料：纳米材料包括磁性捕捉探针、MOFs纳米酶、SERS增强剂，构建定量检测体系。按顺序向食源性致病菌悬液中依次加入磁性捕捉探针、特异性适配体和MOFs纳米酶，最后同时添加反应底物和过氧化氢，根据MOFs纳米酶的催化活性与其表面吸附的适配体之间的关系，建立了致病菌含量与催化产物的光学信号之间的定量关系，从而实现对食源性致病菌高灵敏度的特异性检测，本发明构建的特异性定量检测体系可以通过更换适配体的种类可检测不同的食源性致病菌。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	江苏大学
发明人：	陈全胜;刘双双;李欢欢;贺培欢
专利状态：	有效
申请日期：	2019-03-19T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-16T00:00:00+0800
申请号：	CN201910209448.7
公开号：	CN110018303A
分类号：	G01N33/569(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	212013 江苏省镇江市京口区学府路301号
主权项：	1.一种基于纳米酶催化的食源性致病菌定量检测体系构造方法，其特征在于，以食源性致病菌为研究对象，建立了一种可特异性识别某种食源性致病菌的定量检测体系；合成构建体系所需的纳米材料：纳米材料包括磁性捕捉探针、MOFs纳米酶、SERS增强剂，所述磁性捕捉探针带有与待测致病菌相反的电荷，可与待测致病菌通过静电吸附结合富集细菌；所述MOFs纳米酶具有类过氧化物酶活性和表面吸附功能，MOFs纳米酶的活性可被表面吸附的适配体抑制，使得适配体的添加量会影响纳米酶的活性；优化磁性捕捉探针、适配体和MOFs纳米酶的添加量；构建定量检测体系：按顺序向食源性致病菌悬液中依次加入磁性捕捉探针、特异性适配体和MOFs纳米酶，最后同时添加反应底物和过氧化氢，根据MOFs纳米酶的催化活性与其表面吸附的适配体之间的关系，建立了致病菌含量与催化产物的光学信号之间的定量关系，从而实现对食源性致病菌高灵敏度的特异性检测。 2.根据权利要求1所述的一种基于纳米酶催化的食源性致病菌定量检测体系构造方法，其特征在于，所述特异性检测的方法为：当催化反应结束后，利用反应底物在类过氧化物酶的催化下产生颜色的变化，再采用分光光度法对食源性致病菌进行定量检测。 3.根据权利要求1所述的一种基于纳米酶催化的食源性致病菌定量检测体系构造方法，其特征在于，当催化反应结束后，再加入SERS增强剂，建立催化产物的SERS信号与目标食源性致病菌的浓度之间的线性关系，实现通过SERS信号对食源性致病菌的定量检测。 4.根据权利要求2所述的一种基于纳米酶催化的食源性致病菌定量检测体系构造方法，其特征在于，所述反应底物选用无色孔雀石绿、无色结晶紫、四甲基联苯胺或邻苯二胺。 5.根据权利要求3所述的一种基于纳米酶催化的食源性致病菌定量检测体系构造方法，其特征在于，所述反应底物选用无色孔雀石绿或无色结晶紫。 6.根据权利要求1所述的一种基于纳米酶催化的食源性致病菌定量检测体系构造方法，其特征在于，所述磁性捕捉探针的添加量的优化方法为：将菌悬液离心去掉上清液，用pH 7-7.2的缓冲液清洗以消除培养基的影响，取1ml菌悬液若干，向菌悬液中分别加入相同浓度不同体积的捕捉探针，混合后，磁分离取上清液，在600nm测吸光度，当添加某体积量的捕捉探针时，若OD600值趋于稳定，则该体积选为最优的捕捉探针加入量。 7.根据权利要求1所述的一种基于纳米酶催化的食源性致病菌定量检测体系构造方法，其特征在于，所述MOFs纳米酶的添加量的优化方法为：将pH 7-7.2的缓冲液加入一定量的H2O2和反应底物后，加入相同浓度不同体积的纳米酶孵化后测SERS信号，用催化底物的特征峰进行定量，选择特征峰对应的SERS强度最高的MOFs纳米酶添加量为最优添加量。 8.根据权利要求1所述的一种基于纳米酶催化的食源性致病菌定量检测体系构造方法，其特征在于，所述适配体的添加量的优化方法为：在pH 7-7.2缓冲液中，加入一定量的纳米酶和不同体积的适配体孵化，再加入缓冲液、H2O2和反应底物，孵化之后测体系上清液的SERS信号，当适配体的添加量等于或超过某一体积时，反应后体系的SERS信号都较低，且趋于平稳，选该体积为最优的适配体添加量。 9.根据权利要求1或6所述的一种基于纳米酶催化的食源性致病菌定量检测体系构造方法，其特征在于，所述磁性捕捉探针的制备方法：通过一步水热法合成的表面修饰有氨基，带正电荷的磁性纳米探针，可富集革兰氏阴性菌；通过一步水热法合成的表面含有羧基，带负电荷的磁性纳米探针，可富集革兰氏阳性菌。
所属类别：	发明专利