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原文传递检测食源性致病菌的方法、用于SERS法检测食源性致病菌的试剂及其制备方法

专利名称：	检测食源性致病菌的方法、用于SERS法检测食源性致病菌的试剂及其制备方法
摘要：	本公开涉及一种检测食源性致病菌的方法、用于SERS法检测食源性致病菌的试剂及其制备方法。该检测食源性致病菌的方法包括以下步骤：S1、将十六烷基三甲溴化铵溶液、氯金酸溶液和硼氢化钠溶液混合后进行第一反应；S2、将第一混合液与十六烷基三甲溴化铵溶液、氯金酸溶液、硝酸银溶液和抗坏血酸溶液混合后进行第二反应；S3、将第三混合液与适配体DNA溶液、罗丹明溶液、羟胺盐酸盐溶液和氯金酸溶液混合后进行第三反应；S4、将含有纳米磁球的液体与适配体DNA溶液混合；S5、将拉曼探针溶液、第四混合液和待检测溶液混合后进行测试反应；S6、将食源性致病菌检测混合液进行SERS检测。该方法能够灵敏、准确且快速地检测出待测溶液中是否含有食源性致病菌。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	中国农业科学院农产品加工研究所
发明人：	郑金铠;陆畅;周帅帅;李玉芝
专利状态：	有效
申请日期：	2018-12-25T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-21T00:00:00+0800
申请号：	CN201811594896.5
公开号：	CN109781696A
代理机构：	北京英创嘉友知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	苏瑞;耿超
分类号：	G01N21/65(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	100193 北京市海淀区圆明园西路2号
主权项：	1.一种检测食源性致病菌的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤： S1、将十六烷基三甲溴化铵溶液、氯金酸溶液和硼氢化钠溶液混合后进行第一反应，得到第一混合液； S2、将步骤S1得到的所述第一混合液与含有十六烷基三甲溴化铵溶液、氯金酸溶液、硝酸银溶液和抗坏血酸溶液的第二混合液混合后进行第二反应，收集固体产物；将所述固体产物与水混合，得到第三混合液； S3、将步骤S2得到的所述第三混合液与适配体DNA溶液、罗丹明溶液、羟胺盐酸盐溶液和氯金酸溶液混合后进行第三反应，得到用于检测食源性致病菌的拉曼探针溶液； S4、将含有纳米磁球的液体与所述适配体DNA溶液混合，得到第四混合液； S5、将步骤S3得到的所述用于检测食源性致病菌的拉曼探针溶液、步骤S4得到的所述第四混合液和待检测溶液混合后进行测试反应，磁分离后得到食源性致病菌检测混合液； S6、将步骤S5得到的所述食源性致病菌检测混合液进行SERS检测。 2.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤S1中，所述十六烷基三甲溴化铵溶液、氯金酸溶液和硼氢化钠溶液的摩尔比为1000：(1-10)：(3-12)；所述第一反应的条件为：温度为25-30℃，时间为1-3h；和/或，步骤S2中，所述十六烷基三甲溴化铵溶液、氯金酸溶液、硝酸银溶液和抗坏血酸溶液的摩尔比为1000：(1-25)：(0.1-2.4)：(1-14)；所述第一混合液和所述第二混合液的体积比为(1-5)：1000；所述第二反应的条件为：温度为25-37℃，时间为1-3h；所述固体产物和水的重量比为1：(100-1000)。 3.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤S3中，所述适配体DNA溶液中的DNA序列为5′-ATCCGTCACACCTGCTCTGTCTGCGAGCGGGGCGCGGGCCCGGCGGGGGATGGTGGTGTTGGCTCCCGTAT-3′、5′-GCAATGGTACGGTACTTCCTCGGCACGTTCTCAGTAGCGCTCGCTGGTCATCCCACAGCTACGTCAAAAGTGCACGCTACTTTGCTAA-3′或5′-TATGGCGGCGTCACCCGACGGGGACTTGACATTATGACAG-3′；所述第三混合液、适配体DNA溶液、罗丹明溶液、羟胺盐酸盐溶液和氯金酸溶液的体积比为100：(1-10)：(0.05-1)：(0.1-2)：(0.5-10)；所述第三反应的条件为：温度为25-30℃，时间为1.5-5h；和/或，步骤S4中，所述含有纳米磁球的液体和适配体DNA溶液的体积比为100：(2-10)；所述含有纳米磁球的液体中的纳米磁球为Fe3O4和/或Fe2O3；和/或，步骤S5中，所述待检测溶液、用于检测食源性致病菌的拉曼探针溶液和第四混合液的体积比为1：(20-200)：(20-200)；所述测试反应条件为：温度为25-30℃，时间为0.5-2h。 4.根据权利要求1所述的方法，其中，所述十六烷基三甲溴化铵溶液的浓度为0.02-1mol/L；所述氯金酸溶液的浓度为0.1-10mol/L；所述硼氢化钠溶液的浓度为1-100mmol/L；所述硝酸银溶液的浓度为1-10mmol/L；所述抗坏血酸溶液的浓度为50-100mmol/L；所述适配体DNA溶液的浓度为0.1-10μmol/L；所述罗丹明溶液的浓度为0.1-10μmol/L；所述羟胺盐酸盐溶液的浓度为0.1-1mol/L；所述含有纳米磁球的液体中纳米磁球的浓度为50-500μg/mL。 5.根据权利要求1所述的方法，其中，所述食源性致病菌包括大肠杆菌、副溶血弧菌和沙门氏菌中的至少一种。 6.根据权利要求1所述的方法，其中，该方法还包括：将步骤S5得到的所述食源性致病菌检测混合液进行电镜检测和/或紫外检测。 7.一种制备用于SERS法检测食源性致病菌的试剂的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤： S1、将十六烷基三甲溴化铵溶液、氯金酸溶液和硼氢化钠溶液混合后进行第一反应，得到第一混合液； S2、将步骤S1得到的所述第一混合液与含有十六烷基三甲溴化铵溶液、氯金酸溶液、硝酸银溶液和抗坏血酸溶液的第二混合液混合后进行第二反应，收集固体产物；将所述固体产物与水混合，得到第三混合液； S3、将步骤S2得到的所述第三混合液与适配体DNA溶液、罗丹明溶液、羟胺盐酸盐溶液和氯金酸溶液混合后进行第三反应，得到用于检测致病菌的拉曼探针溶液； S4、将含有纳米磁球的液体与所述适配体DNA溶液混合，得到第四混合液； S5、将步骤S3得到的所述用于检测致病菌的拉曼探针溶液和步骤S4得到的所述第四混合液混合，得到用于SERS法检测食源性致病菌的试剂。 8.根据权利要求7所述的方法，其中，步骤S1中，所述十六烷基三甲溴化铵溶液、氯金酸溶液和硼氢化钠溶液的摩尔比为1000：(1-10)：(3-12)；所述第一反应的条件为：温度为25-30℃，时间为1-3h；和/或，步骤S2中，所述十六烷基三甲溴化铵溶液、氯金酸溶液、硝酸银溶液和抗坏血酸溶液的摩尔比为1000：(1-25)：(0.1-2.4)：(1-14)；所述第一混合液和所述第二混合液的体积比为(1-5)：1000；所述第二反应的条件为：温度为25-37℃，时间为1-3h；所述固体产物和水的重量比为1：(100-1000)；和/或，步骤S3中，所述适配体DNA溶液中的DNA序列为5′-ATCCGTCACACCTGCTCTGTCTGCGAGCGGGGCGCGGGCCCGGCGGGGGATGGTGGTGTTGGCTCCCGTAT-3′、5′-GCAATGGTACGGTACTTCCTCGGCACGTTCTCAGTAGCGCTCGCTGGTCATCCCACAGCTACGTCAAAAGTGCACGCTACTTTGCTAA-3′或5′-TATGGCGGCGTCACCCGACGGGGACTTGACATTATGACAG-3′；所述第三混合液、适配体DNA溶液、罗丹明溶液、羟胺盐酸盐溶液和氯金酸溶液的体积比为100：(1-10)：(0.05-1)：(0.1-2)：(0.5-10)；所述第三反应的条件为：温度为25-30℃，时间为1.5-5h；和/或，步骤S4中，所述含有纳米磁球的液体和适配体DNA溶液的体积比为100：(2-10)；所述含有纳米磁球的液体中的纳米磁球为Fe3O4和/或Fe2O3；和/或，步骤S5中，所述用于检测致病菌的拉曼探针溶液和第四混合液的体积比为1：(1-10)；和/或，所述十六烷基三甲溴化铵溶液的浓度为0.02-1mol/L；所述氯金酸溶液的浓度为0.1-10mol/L；所述硼氢化钠溶液的浓度为1-100mmol/L；所述硝酸银溶液的浓度为1-10mmol/L；所述抗坏血酸溶液的浓度为50-100mmol/L；所述适配体DNA溶液的浓度为0.1-10μmol/L；所述罗丹明溶液的浓度为0.1-10μmol/L；所述羟胺盐酸盐溶液的浓度为0.1-1mol/L；所述含有纳米磁球的液体中纳米磁球的浓度为50-500μg/mL。 9.根据权利要求7所述的方法，其中，所述食源性致病菌包括大肠杆菌、副溶血弧菌和沙门氏菌中的至少一种。 10.由权利要求7～9中任意一项所述的方法制备得到的用于SERS法检测食源性致病菌的试剂。
所属类别：	发明专利