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原文传递一种利用结直肠癌患者和正常人外周血内免疫细胞的分布差异评估免疫力并提供结直肠癌发病情况信息的方法及利用其方法的诊断工具

专利名称：	一种利用结直肠癌患者和正常人外周血内免疫细胞的分布差异评估免疫力并提供结直肠癌发病情况信息的方法及利用其方法的诊断工具
摘要：	本发明涉及一种利用结直肠癌患者和正常人外周血内免疫细胞的分布差异评估外周血的免疫力并利用此数据提供结直肠癌发病情况信息的方法，其特征在于，包括：(A)在外周血免疫细胞中分析细胞尺寸及褶皱程度来划分淋巴细胞(lymphocytes)、单核细胞(monocytes)及粒性白血球(granulocytes)的阶段；(B)至少用一个抗体组合，渍染上述三类免疫细胞的标记，并分析癌症患者和正常人的外周血内免疫细胞分布情况的阶段；(C)在癌症患者和正常人当中，为判定癌症发病情况，而在癌症患者及正常人两个组群中辨别其有意义的标记结果值显示出统计学上的显著性和差异的组合的阶段；以及(D)无需使用流式细胞计或细胞计数仪等计算自然杀伤细胞，利用上述标记检测单位血液中的免疫力，诊断结直肠癌的发病情况的阶段。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	韩国;KR
申请人：	李宗均
发明人：	李宗均;崔重范
专利状态：	有效
申请日期：	2018-01-11T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-16T00:00:00+0800
申请号：	CN201880004489.6
公开号：	CN110023760A
代理机构：	北京青松知识产权代理事务所(特殊普通合伙)
代理人：	郑青松
分类号：	G01N33/574(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	韩国首尔
主权项：	1.一种利用结直肠癌患者和正常人外周血内免疫细胞的分布差异评估外周血的免疫力并利用此数据提供结直肠癌发病情况信息的方法，其特征征在于，包括： (A)在外周血免疫细胞中分析细胞尺寸及褶皱程度来划分淋巴细胞(lymphocytes)、单核细胞(monocytes)及粒性白血球(granulocytes)的阶段； (B)至少用一个抗体组合，渍染上述三类免疫细胞的标记，并分析癌症患者和正常人的外周血内免疫细胞分布情况的阶段； (C)在癌症患者和正常人当中，为判定癌症发病情况，而在癌症患者及正常人两个组群中辨别其有意义的标记结果值显示出统计学上的显著性和差异的组合的阶段；以及 (D)无需使用流式细胞计或细胞计数仪等，利用上述标记检测单位血液中的免疫力，诊断结直肠癌的发病情况的阶段。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在上述阶段(A)将免疫细胞划分为 1)自然杀伤细胞(NKC) 2)Th1Th2(TH) 3)髓源性抑制细胞(MDSCs) 4)调节T细胞(Tregs) 5)细胞毒性T细胞(CTLs) 6)衰竭T细胞(ETc) 7)免疫检查点(ICP) 8)Gamma delta T细胞(GDT) 9)白细胞亚型(WBCS) 等9大类进行分析。 3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，在上述(B)阶段，利用流式细胞计完成自然杀伤细胞(NKC)、Th1Th2(TH)、髓源性抑制细胞(MDSCs)、调节T细胞(Tregs)、细胞毒性T细胞(CTLs)、衰竭T细胞(ETc)、免疫检查点(ICP)，或Gamma delta T细胞(GDT)的细胞分析，而包括在白细胞亚型(WBCS)的WBC、淋巴细胞、中性粒细胞、单核细胞、嗜碱粒细胞或嗜酸粒细胞的细胞分析则利用自动血球分析仪完成。 4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，在上述(B)阶段，对于自然杀伤细胞(NKC)、Th1Th2(TH)、髓源性抑制细胞(MDSCs)、衰竭T细胞(ETc)、Gamma delta T细胞(GDT)免疫细胞，荧光染色其细胞膜(Cell细胞表面)标记；对于调节T细胞(Tregs)、细胞毒性T细胞(CTLs)、免疫检查点(ICP)免疫细胞，则荧光染色其细胞表面(Cell细胞表面)或细胞内部(细胞内部cellular)标记，并使用流式细胞计进行分析。 5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在上述(B)阶段，依据免疫细胞显现的标记，分析对应各标记的免疫细胞显型的分布度(％)、细胞数及其比例。 6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在上述(C)阶段，根据可区分癌症患者和正常人的有意义的标记组合，通过统计学方法计算出P值，并判断上述P值是否满足一定标准。 7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，以平均分布度及细胞数为准，自然杀伤细胞(NKC)在自然杀伤细胞CD314-CD158b-％、自然杀伤细胞CD314-CD158b+％、自然杀伤细胞CD314-CD158b+cells/μL、CD3+CD56-(T细胞)CD314+中显示的上述P值满足一定标准。 8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，以平均分布度及细胞数为准，Th1Th2(TH)在CD4+％、CD4+cells/μL、Th1％、Th2％、Th2cells/μL、Th17 cells/μL中显示的上述P值满足一定标准。 9.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，以平均分布度及细胞数为准，髓源性抑制细胞(MDSCs)在MDSCs cells/μL中显示的上述P值满足一定标准。 10.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，以平均分布度及细胞数为准，调节T细胞(Tregs)在CD4+CD279+(PD-1)％、CD4+CD279+cells/μL、CD4+CD25+％、CD4+CD25+cells/μL、CD4+CD152+(CTLA-4)％、CD4+CD152+cells/μL中显示的上述P值满足一定标准。 11.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，以平均分布度及细胞数为准、细胞毒性T细胞(CTLs)在CD3+CD8+％、CD279+％in CTLs、CD152+％in CTLs、CD152+cells/μLin CTLs中显示的上述P值满足一定标准。 12.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，以平均分布度及细胞数为准，衰竭T细胞(ETc)在CD279+TIGIT+％in CTLs中显示的上述P值满足一定标准。 13.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，以平均分布度及细胞数为准，免疫检查点(ICP)在CD3+CD272+％、CD3+CD223+(LAG3)％、CD3+CD223+cells/μL、淋巴细胞CD223+％、淋巴细胞CD223+cells/μL中显示的上述P值满足一定标准。 14.根据权利要求6所述的方法，其特征在于、以平均分布度及细胞数为准、白细胞亚型(WBCS)在WBC细胞/μL、淋巴细胞％、中性粒细胞％、中性粒细胞/μL、中性粒细胞/淋巴细胞比、单核细胞％、嗜酸粒细胞％、嗜碱粒细胞％中显示的上述P值满足一定标准。 15.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，以癌症患者和正常人的外周血免疫细胞之比(ratio)，在CD4/CD8比、TH1/TH2比中上述P值满足一定标准。 16.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，上述P值可利用表示为23.317-0.403(CD4+％)-0.468(CD3+CD8+％)+0.961(CD4+CD279+％)+0.646(CD4+CD25+％)+0.001(CD4+CD152+％)-0.093(CD279+％in CTLs)+0.131(CD152+％in CTLs)+0.623(CD3+CD272+％)+0.479(CD3+CD223+)-0.221(淋巴细胞％)-0.174(Neutrophils％)-1.056(NLR)+4.576(CTLs/Treg)-0.011(自然杀伤细胞CD314+CD158b-％)+0.739(自然杀伤细胞CD314-CD158b+％)-0.140(T细胞CD314+)+0.450(Th1％)+0.074(Th2％)-7.516(TH1/TH2)-0.001(MDSCs细胞/μL)+0.495(单核细胞％)-1.866(eosinophil％)-13.906(嗜碱粒细胞％)的线性方程式求得。 17.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，上述P值可利用表示为-17.461+0.039(CD3％)+0.141(NK％)+0.320(CD4CD279％)+0.196(CD4+CD25+％)-0.105(CD4+CD152+％)+0.157(CD3+CD366+％)+0.243(CD3+CD272+％)+0.006(CD3+CD223+％)+0.350(CD158b+CD314-CD3-CD56+％)+0.143(Th2％)+0.001(MDSCs cells/μL)的线性方程式求得。 18.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在上述(D)阶段包括， (D-1)设计至少以一个有意义的标记组合值作为系数的线性方程式的阶段，以便区分癌症患者和正常人； (D-2)利用上述线性方程式的值设计癌症患者和正常人的值分别收敛于1和0的指数函数，并在ROC曲线利用约登指数(Youden index)求0和1之间最佳切割值(Cut Value)后，以此为基础导出可以诊断癌症发病情况的二元逻辑回归算法的阶段；以及 (D-3)利用上述回顾性(retrospective)设计算法计算出数值后，对新一组正常人和癌症患者进行随机盲样测定(blind test)，前瞻性地评估外周血的免疫力，从而诊断癌症的阶段。 19.根据权利要求18所述的方法，其特征在于，上述有意义的标记的组合值在CD4+％、CD3+CD8+％、CD4+CD279+％、CD4+CD25+％、CD4+CD152+％、CD279+％in CTLs、CD152+％inCTLs、CD3+CD272+％、CD3+CD223+、淋巴细胞％、Neutrophils％、NLR、CTLs/Treg、自然杀伤细胞CD314+CD158b-％、自然杀伤细胞CD314-CD158b+％、T细胞CD4314+、Th1％、Th2％、TH1/TH2、MDSCs细胞/μL、单核细胞％、嗜酸粒细胞％或嗜碱粒细胞％中至少包括一个。 20.根据权利要求18所述的方法，其特征在于，上述有意义的标记的组合值在CD3、NK、CD4CD279、CD4+CD25+、CD4+CD152、CD3+CD366+、CD3+CD272、CD3+CD223+,CD158b+CD314-CD3-CD56+、Th2或MDSCs cells/μL中至少包括一个。 21.根据权利要求18所述的方法，其特征在于，在上述(D-3)阶段，以敏感度和特异度为准，在敏感度为设定值点时利用二元逻辑回归算法计算出数值后，将该数值设定为第1切割值；并在特异度为设定值点时利用上述算法计算出数值后，将该数值设定为第2切割值；利用上述算法算出的值在上述第1切割值以下的群组为正常，处于第1切割值和第2切割值之间的群组为癌症高危人群，在第2切割值以上时诊断为癌症患者。 22.可利用安装有为实施根据权利要求1至21之一所述方法的电脑程序的电脑来解读的记录媒体。 23.根据权利要求1至21任一项所述的方法提供结直肠癌发病情况信息的诊断工具。
所属类别：	发明专利