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原文传递用于鉴定造血细胞亚型的用途、方法、试剂盒、组合物和抗体

专利名称：	用于鉴定造血细胞亚型的用途、方法、试剂盒、组合物和抗体
摘要：	使用(i)抗‑CD3抗体、(ii)抗‑CD56抗体、(iii)抗‑CD14抗体、(iv)抗‑CD38抗体、(v)抗‑CD45抗体、(vi)抗‑CD90抗体、(vii)抗‑CD135抗体、(viii)抗‑CD10抗体、(ix)抗‑CD11c抗体、(x)抗‑CD19抗体、(xi)抗‑CD34抗体、(xii)抗‑CD45RA抗体、(xiii)抗‑CD7抗体、(xiv)抗‑CD71抗体、(xv)抗‑CD41/CD61复合抗体或抗‑CD41抗体和/或抗‑CD61抗体、(xvi)抗‑CD33抗体和/或抗‑CD66b抗体，用于鉴定分离样品中的造血细胞亚型，确定分离样品中造血细胞亚型的相对频率和/或对分离样品中造血细胞亚型内的细胞数进行定量的用途，其中使用不同荧光染料标记(i)至(xvi)的每一个，其中当(xvi)是抗‑CD33抗体和抗‑CD66b抗体时，使用相同荧光染料标记抗‑CD33抗体和抗‑CD66b抗体，和其中当(xv)是抗‑CD41抗体和抗‑CD61抗体时，使用相同荧光染料标记抗‑CD41抗体和抗‑CD61抗体。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	意大利;IT
申请人：	圣拉斐尔医院有限责任公司
发明人：	L.巴索-里奇;L.比亚斯科;A.艾乌蒂
专利状态：	有效
申请日期：	2017-10-17T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-16T00:00:00+0800
申请号：	CN201780073928.4
公开号：	CN110023736A
代理机构：	北京市柳沈律师事务所
代理人：	易方方
分类号：	G01N15/14(2006.01);G;G01;G01N;G01N15
申请人地址：	意大利米兰
主权项：	1.使用(i)抗-CD3抗体、(ii)抗-CD56抗体、(iii)抗-CD14抗体、(iv)抗-CD38抗体、(v)抗-CD45抗体、(vi)抗-CD90抗体、(vii)抗-CD135抗体、(viii)抗-CD10抗体、(ix)抗-CD11c抗体、(x)抗-CD19抗体、(xi)抗-CD34抗体、(xii)抗-CD45RA抗体、(xiii)抗-CD7抗体、(xiv)抗-CD71抗体、(xv)抗-CD41/CD61复合抗体或抗-CD41抗体和/或抗-CD61抗体、(xvi)抗-CD33抗体和/或抗-CD66b抗体用于鉴定分离样品中的造血细胞亚型，确定分离样品中造血细胞亚型的相对频率和/或对分离样品中造血细胞亚型内的细胞数进行定量的用途，其中使用不同荧光染料标记(i)至(xvi)的每一个，其中当(xvi)是抗-CD33抗体和抗-CD66b抗体时，使用相同荧光染料标记抗-CD33抗体和抗-CD66b抗体，和其中当(xv)是抗-CD41抗体和抗-CD61抗体时，使用相同荧光染料标记抗-CD41抗体和抗-CD61抗体。 2.使用(B-i)抗-CD3抗体、(B-ii)抗-CD56抗体、(B-iii)抗-CD45抗体、(B-iv)抗-CD19抗体、(B-v)抗-CD45RA抗体、(B-vi)抗-CD33抗体和/或抗-CD66b抗体、(B-vii)抗-CD4抗体、(B-viii)抗-CD8抗体、(B-ix)抗-CD95抗体、(B-x)抗-TCRγδ抗体、(B-xi)抗-CD127抗体、(B-xii)抗-CD62L抗体、(B-xiii)抗-CD25抗体用于鉴定分离样品中的淋巴细胞亚型，确定分离样品中淋巴细胞亚型的相对频率和/或对分离样品中淋巴细胞亚型内的细胞数进行定量的用途，其中使用不同荧光染料标记(B-i)至(B-xiii)的每一个，其中当(B-vi)是抗-CD33抗体和抗-CD66b抗体时，使用相同荧光染料标记抗-CD33抗体和抗-CD66b抗体。 3.根据权利要求1所述的用途，其中(xv)是抗-CD41/CD61复合抗体。 4.根据权利要求1-3中任意一项所述的用途，其中(xvi)或(B-vi)是抗-CD33抗体和抗-CD66b抗体。 5.根据权利要求1-4中任意一项所述的用途，用于鉴定选自下组的一种或多种造血细胞亚型，确定其相对频率和/或对其中的细胞数进行定量：未成熟多形核白细胞(iPMN)、多形核白细胞(PMN)、单核细胞、树突状细胞(DC)/DC祖细胞、成髓细胞、T细胞、自然杀伤T细胞(NKT)、自然杀伤细胞(NK)、B-细胞、前-B细胞、原-B细胞、原淋巴细胞、原成红细胞、成红细胞、造血干细胞(HSC)、多能祖细胞(MPP)、多能淋巴祖细胞(MLP)、早期T祖细胞(ETP)、前-B/自然杀伤细胞(PRE-B/NK)、共同骨髓祖细胞(CMP)、粒细胞/巨噬细胞祖细胞(GMP)和巨核细胞/红细胞祖细胞(MEP)。 6.一种用于鉴定分离样品中的造血细胞亚型、确定其相对频率和/或对其中的细胞数进行定量的方法，所述方法包括以下步骤： (a)将所述样品与(i)抗-CD3抗体、(ii)抗-CD56抗体、(iii)抗-CD14抗体、(iv)抗-CD38抗体、(v)抗-CD45抗体、(vi)抗-CD90抗体、(vii)抗-CD135抗体、(viii)抗-CD10抗体、(ix)抗-CD11c抗体、(x)抗-CD19抗体、(xi)抗-CD34抗体、(xii)抗-CD45RA抗体、(xiii)抗-CD7抗体、(xiv)抗-CD71抗体、(xv)抗-CD41/CD61复合抗体或抗-CD41抗体和/或抗-CD61抗体(xvi)抗-CD33抗体和/或抗-CD66b抗体接触，其中使用不同荧光染料标记(i)至(xvi)的每一个，其中当(xvi)是抗-CD33抗体和抗-CD66b抗体时，使用相同荧光染料标记抗-CD33抗体和抗-CD66b抗体，和其中当(xv)是抗-CD41抗体和抗-CD61抗体时，使用相同荧光染料标记抗-CD41抗体和抗-CD61抗体； (b)检测荧光染料标记的造血细胞。 7.根据权利要求6所述的方法，其中所述方法还包括以下步骤： (c)提供所述样品的另一部分，该部分未在步骤(a)和/或(b)中使用； (d)将步骤(c)的所述样品与(B-i)抗-CD3抗体、(B-ii)抗-CD56抗体、(B-iii)抗-CD45抗体、(B-iv)抗-CD19抗体、(B-v)抗-CD45RA抗体、(B-vi)抗-CD33抗体和/或抗-CD66b抗体、(B-vii)抗-CD4抗体、(B-viii)抗-CD8抗体、(B-ix)抗-CD95抗体、(B-x)抗-TCRγδ抗体、(B-xi)抗-CD127抗体、(B-xii)抗-CD62L抗体、(B-xiii)抗-CD25抗体接触，其中使用不同荧光染料标记(B-i)至(B-xiii)的每一个，其中当(B-vi)是抗-CD33抗体和抗-CD66b抗体时，使用相同荧光染料标记抗-CD33抗体和抗-CD66b抗体； (e)检测荧光染料标记的淋巴细胞。 8.根据权利要求6或7所述的方法，其中(xv)是抗-CD41/CD61复合抗体。 9.根据权利要求6-8中任意一项所述的方法，其中(xvi)和/或(B-vi)是抗-CD33抗体和抗-CD66b抗体。 10.根据权利要求6-9中任意一项所述的方法，其中检测荧光染料标记的造血和/或淋巴细胞的步骤通过流式细胞术进行。 11.根据权利要求6-10中任意一项所述的方法，其中所述方法还包括将所述样品与荧光细胞活力标记物接触的步骤；优选地其中所述荧光细胞活力标记物选自碘化丙啶(PI)、叠氮溴化丙啶、叠氮溴化乙锭、钙黄绿素AM、7-氨基放线菌素(7-AAD)、4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)及其衍生物；更优选地其中所述荧光细胞活力标记物是PI。 12.根据权利要求6-11中任意一项所述的方法，其中在步骤(a)和/或步骤(c)的接触之前，将所述样品与已知数量的微球接触。 13.根据权利要求6-12中任意一项所述的方法，其中所述方法还包括使用门控策略，所述门控策略包括以下步骤： (a)排除细胞聚集体和死细胞； (b)鉴定CD45+细胞(白细胞)； (c)区分骨髓细胞群和淋巴细胞群； (d)鉴定所述骨髓细胞和淋巴细胞的主要亚群； (e)鉴定造血干细胞和祖细胞(HSPC)子集。 14.根据权利要求6-12中任意一项所述的方法，其中所述方法还包括使用门控策略，所述门控策略包括以下步骤： (a)排除细胞聚集体和死细胞； (b)鉴定CD34+细胞(祖细胞)； (c)鉴定CD45+细胞(白细胞)； (d)从CD34+CD45+细胞群鉴定HSPC子集和LIN+CD34+子集。 15.根据权利要求6-14中任意一项所述的方法，其中所述方法还包括以下步骤： (a)裂解所述样品中的红细胞；和 (b)从所述裂解的红细胞中分离所述样品中的未裂解细胞。 16.根据权利要求6-15中任意一项所述的方法，其中所述方法用于鉴定选自下组的一种或多种造血细胞亚型，确定其相对频率和/或对其中的细胞数进行定量：未成熟多形核白细胞(iPMN)、多形核白细胞(PMN)、单核细胞、树突状细胞(DC)/DC祖细胞、成髓细胞、T细胞、自然杀伤T细胞(NKT)、自然杀伤细胞(NK)、B-细胞、前-B细胞、原-B细胞、原淋巴细胞、原成红细胞、成红细胞、造血干细胞(HSC)、多能祖细胞(MPP)、多能淋巴祖细胞(MLP)、早期T祖细胞(ETP)、前-B/自然杀伤细胞(PRE-B/NK)、共同骨髓祖细胞(CMP)、粒细胞/巨噬细胞祖细胞(GMP)和巨核细胞/红细胞祖细胞(MEP)。 17.根据权利要求6-16中任意一项所述的方法，其中所述样品是全血样品，和/或其中所述样品获自外周血、骨髓、脐带血(CB)、动员的PB(mPB)、人向小鼠(human-in-mouse)的异种移植或体外人细胞悬液。 18.根据权利要求6-17中任意一项所述的方法，其中所述样品是50-1000μl，优选地其中所述样品是100-500μl。 19.根据权利要求6-18中任意一项所述的方法，其中鉴定了所述样品中大于95％的所述造血细胞亚型，优选地其中鉴定了所述样品中大于99％的所述造血细胞亚型，更优选地其中鉴定了所述样品中大于99.5％的所述造血细胞亚型。 20.一种用于鉴定造血细胞亚型、确定其相对频率和/或对其中的细胞数进行定量的试剂盒，所述试剂盒包含(i)抗-CD3抗体、(ii)抗-CD56抗体、(iii)抗-CD14抗体、(iv)抗-CD38抗体、(v)抗-CD45抗体、(vi)抗-CD90抗体、(vii)抗-CD135抗体、(viii)抗-CD10抗体、(ix)抗-CD11c抗体、(x)抗-CD19抗体、(xi)抗-CD34抗体、(xii)抗-CD45RA抗体、(xiii)抗-CD7抗体、(xiv)抗-CD71抗体、(xv)抗-CD41/CD61复合抗体或抗-CD41抗体和/或抗-CD61抗体、(xvi)抗-CD33抗体和/或抗-CD66b抗体，其中使用不同荧光染料标记(i)至(xvi)的每一个，其中当(xvi)是抗-CD33抗体和抗-CD66b抗体时，使用相同荧光染料标记抗-CD33抗体和抗-CD66b抗体，和其中当(xv)是抗-CD41抗体和抗-CD61抗体时，使用相同荧光染料标记抗-CD41抗体和抗-CD61抗体；任选地，其中所述试剂盒还包含(B-i)抗-CD3抗体、(B-ii)抗-CD56抗体、(B-iii)抗-CD45抗体、(B-iv)抗-CD19抗体、(B-v)抗-CD45RA抗体、(B-vi)抗-CD33抗体和/或抗-CD66b抗体、(B-vii)抗-CD4抗体、(B-viii)抗-CD8抗体、(B-ix)抗-CD95抗体、(B-x)抗-TCRγδ抗体、(B-xi)抗-CD127抗体、(B-xii)抗-CD62L抗体、(B-xiii)抗-CD25抗体，其中使用不同荧光染料标记(B-i)至(B-xiii)的每一个，其中当(B-vi)是抗-CD33抗体和抗-CD66b抗体时，使用相同荧光染料标记抗-CD33抗体和抗-CD66b抗体；任选地，其中所述试剂盒还包含微球，优选地荧光标记的微球，用于提供内部计数标准品；任选地其中所述试剂盒还包含红细胞裂解缓冲液。 21.一种用于鉴定造血细胞亚型、确定其相对频率和/或对其中的细胞数进行定量的组合物，所述组合物包含(i)抗-CD3抗体、(ii)抗-CD56抗体、(iii)抗-CD14抗体、(iv)抗-CD38抗体、(v)抗-CD45抗体、(vi)抗-CD90抗体、(vii)抗-CD135抗体、(viii)抗-CD10抗体、(ix)抗-CD11c抗体、(x)抗-CD19抗体、(xi)抗-CD34抗体、(xii)抗-CD45RA抗体、(xiii)抗-CD7抗体、(xiv)抗-CD71抗体、(xv)抗CD41/CD61复合抗体或抗-CD41抗体和/或抗-CD61抗体、(xvi)抗-CD33抗体和/或抗-CD66b抗体，其中使用不同荧光染料标记(i)至(xvi)的每一个，其中当(xvi)是抗-CD33抗体和抗-CD66b抗体时，使用相同荧光染料标记抗-CD33抗体和抗-CD66b抗体，和其中当(xv)是抗-CD41抗体和抗-CD61抗体时，使用相同荧光染料标记抗-CD41抗体和抗-CD61抗体。 22.根据权利要求20所述的试剂盒或根据权利要求21所述的组合物，其中(xv)是抗CD41/CD61复合抗体。 23.根据权利要求20-22中任意一项所述的试剂盒或组合物，其中(xvi)和/或(B-vi)是抗-CD33抗体和抗-CD66b抗体。 24.根据权利要求20-23中任意一项所述的试剂盒或组合物，还包含荧光细胞活力标记物；优选地其中所述荧光细胞活力标记物选自碘化丙啶(PI)、叠氮溴化丙啶、叠氮溴化乙锭、钙黄绿素AM、7-氨基放线菌素(7-AAD)、4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)及其衍生物；更优选地其中所述荧光细胞活力标记物是PI。 25.抗-CD90抗体(i)用于诊断血液病症的用途，其中将所述抗-CD90抗体(i)与抗-CD3抗体(ii)、抗-CD56抗体(iii)、抗-CD14抗体(iv)、抗-CD38抗体(v)、抗-CD45抗体(vi)、抗-CD135抗体(vii)、抗-CD10抗体(viii)、抗-CD11c抗体(ix)、抗-CD19抗体(x)、抗-CD34抗体(xi)、抗-CD45RA抗体(xii)、抗-CD7抗体(xiii)、抗-CD71抗体(xiv)、抗CD41/CD61复合抗体或抗-CD61抗体和/或抗-CD41抗体(xv)、抗-CD33抗体和/或抗-CD66b抗体(xvi)联用，其中使用不同荧光染料标记(i)至(xvi)的每一个，其中当(xvi)是抗-CD33抗体和抗-CD66b抗体时，使用相同荧光染料标记抗-CD33抗体和抗-CD66b抗体，和其中当(xv)是抗-CD41抗体和抗-CD61抗体时，使用相同荧光染料标记抗-CD41抗体和抗-CD61抗体。 26.根据权利要求1-5中任意一项所述的用途，根据权利要求6-19中任意一项所述的方法，根据权利要求20-24中任意一项所述的试剂盒或组合物，或者用于根据权利要求25所述用途的抗-CD90抗体，其中所述荧光染料选自下组：小分子荧光染料、蛋白荧光染料、有机聚合物荧光染料及其多组分组合；优选地其中所述荧光染料选自下组：别藻蓝蛋白(APC)、别藻蓝蛋白花青7(APC-Cy7)、别藻蓝蛋白R700(APC-R700)、藻红蛋白(PE)、藻红蛋白花青5(PE-Cy5)、藻红蛋白花青7(PE-Cy7)、多甲藻素叶绿素蛋白花青5.5(PerCP-Cy5.5)、亮蓝515(BB515)、亮紫421(BV421)、亮紫510(BV510)、亮紫605(BV605)、亮紫650(BV650)、亮紫711(BV711)、亮紫785(BV785)、Brilliant Ultraviolet 395(BUV395)和Brilliant Ultraviolet 737(BUV 737)。 27.根据权利要求26所述的用途、方法、试剂盒、组合物或抗-CD90抗体，其中抗-CD90抗体使用蛋白荧光染料标记，抗-CD3抗体使用有机聚合物荧光染料标记，抗-CD56抗体使用包含蛋白荧光染料和小分子荧光染料的多组分荧光染料标记，抗-CD14抗体使用有机聚合物荧光染料标记，抗-CD38抗体使用有机聚合物荧光染料标记，抗-CD45抗体使用有机聚合物荧光染料标记，抗-CD135抗体使用蛋白荧光染料标记，抗-CD10抗体使用有机聚合物荧光染料标记，抗-CD11c抗体使用有机聚合物荧光染料标记，抗-CD19抗体使用包含蛋白荧光染料和小分子荧光染料的多组分荧光染料标记，抗-CD34抗体使用有机聚合物荧光染料标记，抗-CD45RA抗体使用包含蛋白荧光染料和小分子荧光染料的多组分荧光染料标记，抗-CD7抗体使用包含蛋白荧光染料和小分子荧光染料的多组分荧光染料标记，抗-CD71抗体使用有机聚合物荧光染料标记，抗-CD41/CD61复合抗体使用包含蛋白荧光染料和小分子荧光染料的多组分荧光染料标记，抗-CD61抗体使用包含蛋白荧光染料和小分子荧光染料的多组分荧光染料标记，抗-CD41抗体使用包含蛋白荧光染料和小分子荧光染料的多组分荧光染料标记，抗-CD33抗体使用有机聚合物荧光染料标记和/或抗-CD66b抗体使用有机聚合物荧光染料标记；优选地其中抗-CD90抗体使用APC标记，抗-CD3抗体使用BV605标记，抗-CD56抗体使用PE-Cy5标记，抗-CD14抗体使用BV510标记，抗-CD38抗体使用BUV737标记，抗-CD45抗体使用BUV395标记，抗-CD135抗体使用PE标记，抗-CD10抗体使用BV785标记，抗-CD11c抗体使用BV650标记，抗-CD19抗体使用APC-R700标记，抗-CD34抗体使用BV421标记，抗-CD45RA抗体使用APC-Cy7标记，抗-CD7抗体使用PerCP-Cy5.5标记，抗-CD71抗体使用BV711标记，抗-CD41/CD61复合抗体使用PE-Cy7标记，抗-CD41抗体使用PE-Cy7标记，抗-CD61抗体使用PE-Cy7标记，抗-CD33抗体使用BB515标记和/或抗-CD66b抗体使用BB515标记。
所属类别：	发明专利