详情

原文传递一种赭曲霉毒素的检测试剂盒及其检测赭曲霉毒素的方法

专利名称：	一种赭曲霉毒素的检测试剂盒及其检测赭曲霉毒素的方法
摘要：	本发明公开了一种赭曲霉毒素的检测试剂盒及其检测赭曲霉毒素的方法，属于有害物质检测技术领域。本发明赭曲霉毒素的检测试剂盒，包括赭曲霉毒素的核酸适配体、与该核酸适配体不完全互补的cDNA、两个发卡序列H1和H2；其中，所述赭曲霉毒素的核酸适配体的序列如序列表SEQ ID NO.1所示；所述两个发卡序列H1和H2能够自组装成长链；所述与赭曲霉毒素核酸适配体不完全互补的cDNA能够触发发卡序列H1和H2的自组装。本发明提供的试剂盒，具有很高的灵敏度与特异性，操作简单，检测快速，结果肉眼可见，适合所有实验室进行推广，无需专业培训即可实现对赭曲霉毒素的实时现场分析。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山东;37
申请人：	青岛农业大学
发明人：	吴薇;杨庆利;于春娣
专利状态：	有效
申请日期：	2019-05-08T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-19T00:00:00+0800
申请号：	CN201910380743.9
公开号：	CN110031441A
代理机构：	北京天奇智新知识产权代理有限公司
代理人：	贾文健
分类号：	G01N21/64(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	266109 山东省青岛市城阳区长城路700号
主权项：	1.一种赭曲霉毒素的检测试剂盒，其特征在于：包括赭曲霉毒素的核酸适配体、与该核酸适配体不完全互补的cDNA、两个发卡序列H1和H2；其中，所述赭曲霉毒素的核酸适配体的序列如序列表SEQ ID NO.1所示；所述两个发卡序列H1和H2能够自组装成长链；所述与赭曲霉毒素核酸适配体不完全互补的cDNA能够触发发卡序列H1和H2的自组装。 2.根据权利要求1所述赭曲霉毒素的检测试剂盒，其特征在于：所述与赭曲霉毒素核酸适配体不完全互补的cDNA一端具有与发卡序列H1环部序列互补的序列；这段序列通过与发卡序列H1的环部序列互补配对，打开发卡序列H1的茎环结构，以此触发发卡序列H1和H2的自组装。 3.根据权利要求2所述赭曲霉毒素的检测试剂盒，其特征在于：所述发卡序列H1的茎部序列与发卡序列H2的环部序列互补，被打开的发卡序列H1通过序列互补打开发卡序列H2的茎环结构；发卡序列H2的茎部序列与发卡序列H1环部序列完全互补或不完全互补；被打开的发卡序列H2通过序列互补进一步打开另一个发卡序列H1的茎环结构；以此完成自组装过程。 4.根据权利要求3所述赭曲霉毒素的检测试剂盒，其特征在于：所述发卡序列H1和H2的3’端和5’端分别具有能够形成G-四聚体结构的部分前体核苷酸序列。 5.根据权利要求1～4任一项所述赭曲霉毒素的检测试剂盒，其特征在于：所述与赭曲霉毒素核酸适配体不完全互补的cDNA与所述赭曲霉毒素核酸适配体之间不互补的碱基个数为3-7个。 6.根据权利要求5所述赭曲霉毒素的检测试剂盒，其特征在于：所述与赭曲霉毒素核酸适配体不完全互补的cDNA序列如序列表SEQ ID NO.2所示。 7.根据权利要求1～4任一项所述赭曲霉毒素的检测试剂盒，其特征在于：所述发卡序列H1和H2的序列如序列表SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。 8.根据权利要求4所述赭曲霉毒素的检测试剂盒，其特征在于：还包括高铁血红素和过氧化物酶HRP的催化底物。 9.一种赭曲霉毒素的检测方法，其特征在于：步骤为： (1)将赭曲霉毒素核酸适配体和与该核酸适配体不完全互补的cDNA混合后，95℃水浴5min后，置于室温冷却，使两者通过核酸互补配对形成双链； (2)向体系中加入待测样品，室温反应30min，使得赭曲霉毒素与双链中的赭曲霉毒素核酸适配体结合并打开双链结构；使与该核酸适配体不完全互补的cDNA游离成单链； (3)向2)中反应体系中加入发卡序列H1和H2的混合液，室温反应1小时，进行自组装反应； (4)向3)中反应体系中加入高铁血红素，室温反应10min； (5)向4)中反应体系中加入过氧化物酶HRP的催化底物，室温反应5-10分钟，终止反应；其中，所述赭曲霉毒素的核酸适配体的序列如序列表SEQ ID NO.1所示；所述与赭曲霉毒素核酸适配体不完全互补的cDNA一端具有与发卡序列H1环部序列互补的序列；这段序列通过与发卡序列H1的环部序列互补配对，打开发卡序列H1的茎环结构，以此触发发卡序列H1和H2的自组装；所述发卡序列H1的茎部序列与发卡序列H2的环部序列互补，被打开的发卡序列H1通过序列互补打开发卡序列H2的茎环结构；发卡序列H2的茎部序列与发卡序列H1环部序列完全互补或不完全互补；被打开的发卡序列H2通过序列互补进一步打开另一个发卡序列H1的茎环结构；以此完成自组装过程；所述发卡序列H1和H2的3’端和5’端分别具有能够形成G-四聚体结构的部分前体核苷酸序列；所述与赭曲霉毒素核酸适配体不完全互补的cDNA与所述赭曲霉毒素核酸适配体之间不互补的碱基个数为3-7个。 10.根据权利要求9所述赭曲霉毒素的检测方法，其特征在于：所述与赭曲霉毒素核酸适配体不完全互补的cDNA序列如序列表SEQ ID NO.2所示；所述发卡序列H1和H2的序列如序列表SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。
所属类别：	发明专利