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原文传递一种检测食品中罗丹明B残留量的方法

专利名称：	一种检测食品中罗丹明B残留量的方法
摘要：	本发明公开了一种检测食品中罗丹明B残留量的方法，包括下列步骤：(1)罗丹明B进行化合物结构修饰，得到修饰后的罗丹明B；(2)人工抗原和包被原的制备；(3)抗血清的制备与纯化；(4)间接竞争ELISA方法建立及优化；(5)免疫亲和色谱(IAC)‑HPLC/MS/MS方法的建立。本发明的检测食品中罗丹明B残留量的方法基于免疫学的原理，对罗丹明B进行化合物结构修饰，得到修饰后的罗丹明B(全新的半抗原)，用于灵敏度高的多克隆抗体的制备，继而建立免疫亲和色谱(IAC)‑HPLC/MS的新型的检测方法成，是一种简单、快速、低廉、准确的检测方法。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	浙江;33
申请人：	浙江省检验检疫科学技术研究院嘉兴分院
发明人：	应晓虹;谭军;陈剑伟;庞明利;孔繁迪;张萌萌;谈金辉;吴莉莉
专利状态：	有效
申请日期：	2019-05-14T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-19T00:00:00+0800
申请号：	CN201910398973.8
公开号：	CN110031566A
代理机构：	嘉兴启帆专利代理事务所(普通合伙)
代理人：	廖银洪
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	314000 浙江省嘉兴市文昌路1299号
主权项：	1.一种检测食品中罗丹明B残留量的方法，其特征在于，包括下列步骤： (1)罗丹明B进行化合物结构修饰，得到修饰后的罗丹明B，其结构如式(Ⅰ)所示：其中，n为1～8中的任一整数；R为COOH,NH2,SH,OH中的任一基团； (2)人工抗原和包被原的制备以牛血清蛋白BSA、卵清蛋白OVA为连接蛋白载体，选用牛血清蛋白BSA做免疫原载体，卵清蛋白OVA做包被原载体；将修饰后的罗丹明B与BSA偶联后形成免疫原RB-BSA，修饰后的罗丹明B同OVA作用形成包被原； (3)抗血清的制备与纯化利用免疫原RB-BSA免疫新西兰大白兔，制备多克隆抗体，采用间接ELISA检测方法测定效价、抑制率，筛选出特异性好的多克隆抗体，并对血清进行抑制率测定及交叉反应测定； (4)间接竞争ELISA方法建立及优化采用饱和硫酸铵盐析法将抗血清进行纯化，减少杂蛋白的影响；抗血清纯化后用紫外测浓度，利用棋盘法确定包被原和纯化后抗血清的最适工作浓度，进而确定IC50值； (5)免疫亲和色谱(IAC)-HPLC/MS/MS方法的建立利用步骤(3)中得到的多克隆抗体制备出可特异性保留净化罗丹明B的IAC柱，采用IAC-LC/MS/MS对食品中罗丹明B残留量进行检测。 2.根据权利要求1所述的检测食品中罗丹明B残留量的方法，其特征在于：步骤(1)中，所述修饰后的罗丹明B的合成路线如下： 3.根据权利要求1所述的检测食品中罗丹明B残留量的方法，其特征在于：步骤(2)中，所述免疫原RB-BSA中所述修饰后的罗丹明B的偶联数为5～15。 4.根据权利要求1所述的检测食品中罗丹明B残留量的方法，其特征在于：步骤(5)中，所述IAC柱的制备方法如下： ①.将稀HCl、去离子水、四甲氧基硅烷混匀，超声粉碎，吸取罗丹明B抗体溶液，混匀，使之凝胶，老化，然后将凝胶研磨碎，装柱； ②.待柱中凝胶沉积稳定后，用PBS预淋洗，洗去未包埋的抗体和其他干扰杂质，最后用PBS平衡，4℃保存，完成IAC柱的制备。 5.根据权利要求1所述的检测食品中罗丹明B残留量的方法，其特征在于：步骤(5)中，所述IAC柱的使用方法如下： IAC柱加样使用前用PBS平衡后加样，超纯水洗涤，洗去未吸附样品。甲醇溶液洗脱柱上样品，收集洗脱液，洗脱液经0.22μm孔径的聚四氟乙烯膜过滤后进行LC/MS检测。 6.根据权利要求1至5任一项所述的检测食品中罗丹明B残留量的方法在香肠、辣椒粉、花椒或火锅底料中罗丹明B残留量的检测中的应用。
所属类别：	发明专利