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原文传递一种糖类抗原242磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法

专利名称：	一种糖类抗原242磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法
摘要：	本发明公开了一种糖类抗原242（CA242）磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，所述试剂盒包括：糖类抗原242校准品；偶联有糖类抗原242单克隆抗体的磁微粒悬浮液；糖类抗原242单克隆抗体酶结合物，所用的酶为辣根过氧化物酶，辣根过氧化物酶纯度RZ≥3.0，活性≥250U/mL；糖类抗原242质控品；化学发光液A液和B液；20倍浓缩洗液；反应管。另外本发明还公开了本发明试剂盒的制备方法。本发明试剂盒与现有试剂盒相比灵敏度高、可测定浓度范围宽、试剂有效期长、操作简单、检测时间短、检测自动化程度高等优点。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	天津;12
申请人：	博奥赛斯(天津)生物科技有限公司
发明人：	刘萍;田云霞;张影
专利状态：	有效
申请日期：	2018-01-13T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-23T00:00:00+0800
申请号：	CN201810038426.4
公开号：	CN110045123A
分类号：	G01N33/577(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	300300 天津市东丽区东丽开发区四纬路10号201
主权项：	1.一种糖类抗原242磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括： 1）糖类抗原242校准品，浓度为0，5，20，50，100，200U/mL； 2）偶联有糖类抗原242单克隆抗体的磁微粒悬浮液； 3）糖类抗原242抗体酶结合物，所用抗体为单克隆抗体，所用的酶为辣根过氧化物酶，辣根过氧化物酶纯度RZ ≥ 3.0，活性≥ 250U/mL； 4）糖类抗原242质控品；质控品包括浓度12U/mL的低值质控品和150U/mL的高值质控品； 5）化学发光液A液和B液；A液为5mmol/L，pH8.6的Tris-HCl缓冲液，且该缓冲液中含有终浓度0.7g/L鲁米诺和终浓度0.165g/L对碘酚；B液为0.675g/L过氧化脲； 6） 20倍浓缩洗液； 7）反应管。 2.根据权利要求1所述的糖类抗原242磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述的磁微粒是表面包裹带有氨基或羧基活性基团的四氧化三铁，粒径10-50nm。 3.根据权利要求1所述的糖类抗原242磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述的反应管的材料是透明聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯或玻璃。 4.权利要求1-3任一权利要求所述的试剂盒的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）糖类抗原242校准品的配制：将糖类抗原242纯品用校准品稀释液配稀释至工作浓度，分别为0，5，20，50，100，200U/mL；校准品稀释液成分为牛血清，要求外观为浅黄色呈稍粘稠的液体，无溶血或异物；总蛋白含量不小于32mg/mL；球蛋白含量不大于2mg/mL；（2）糖类抗原242质控品的配制：用校准品稀释液将糖类抗原242纯品稀释至12U/mL和150U/mL，12U/mL为低值质控品，150U/mL为高值质控品；（3）磁微粒偶联糖类抗原242单克隆抗体的制备： A、四氧化三铁磁微粒制备采用沉淀法制备四氧化三铁磁微粒，具体制备方法如下：1）将FeCl3·6H2O和FeCl2.4H2O以摩尔比2：1加入到蒸馏水中，剧烈搅拌溶解；2）在氮气环境下加0.5M 氨水于上述铁盐溶液中，调pH9-10，反应温度65℃，反应时间45min；3）反应结束后，用蒸馏水洗涤至中性，弃上清，于60℃烘干，即得10-50nm的四氧化三铁磁微粒； B、磁珠表面羧基的偶联采用分散聚合法进行偶联，具体制备方法如下：取上述制备的磁微粒超声分散在10%PEG8000溶液中，得磁流体溶液，向磁流体溶液中按体积比1：10加入无水乙醇，搅拌30min后，移入带有搅拌器，冷凝管，氮气入口的三颈瓶中，加入交联剂N,N’-亚甲基双丙烯酰胺；在氮气的保护下，升温至60±1℃，恒温搅拌30min，之后依次加入磁流体体积3%的过氧化苯甲酰，搅拌速度约为500rpm，磁流体溶液相同体积的苯乙烯，磁流体溶液体积25%的丙烯酸，保持氮气气流, 其余条件保持不变, 反应8 -10h，所得产物静置，用蒸馏水反复洗涤，再用盐酸调节p H = 1，浸泡24h，静置；再用蒸馏水反复洗涤，除去未包覆的Fe3O4磁粉，把沉淀下来的产品放入真空干燥箱中50℃下干燥24h，得到表面联有羧基的磁微粒； C、磁微粒单克隆抗体的制备，配制1L，方法如下：取100mL0.1M MES缓冲液，加入10mg表面联有羧基的磁微粒，室温搅拌40min，之后加入3.5mg糖类抗原242单克隆抗体，然后加入5mg/mL EDC溶液，2-8℃反应1h后，用0.01M PBS缓冲液洗涤3次，最后用0.01M PBS定溶至1L即可；（4）糖类抗原242抗体酶结合物的制备采用改良高碘酸钠氧化法将糖类抗原242抗体与辣根过氧化物酶进行偶联后，用酶稀释液将其稀释至工作浓度1:6000，并加入10%酶稳定剂，储存于2~8℃；（5）20倍浓缩洗液的配制 20倍浓缩洗液包括58g/L 磷酸氢二钠，5.92g/L磷酸二氢钠，180g/L NaCl，10mL/LTween-20和2% Proclin300；（6）化学发光液A液和B液的配制 A液为0.7g/L鲁米诺，0.165g/L对碘酚，缓冲液为pH8.6的5mmol/L Tris-HCl，避光保存；B液为0.675g/L过氧化脲，用工艺用水配制；A液和B液在使用前5min混合；（7）组装：将上述试剂组装成盒，储存于2~8℃，每种试剂各一瓶；（8）对采用该方法制备的试剂盒进行物理检查，对准确度、剂量-反应曲线的线性、精密度、特异性、灵敏度、质控品的测定值和稳定性进行测定。
所属类别：	发明专利