详情

原文传递一种CYFRA21-1磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法

专利名称：	一种CYFRA21-1磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法
摘要：	本发明公开了一种CYFRA21‑1磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，所述试剂盒包括：CYFRA21‑1校准品；偶联有链霉亲和素的磁微粒悬浮液；生物素标记的CYFRA21‑1抗体；CYFRA21‑1抗体酶结合物，所用的酶为辣根过氧化物酶，辣根过氧化物酶纯度RZ≥3.0，活性≥250U/mL；CYFRA21‑1质控品；化学发光液A液和B液；20倍浓缩洗液；反应管。另外本发明还公开了本发明试剂盒的制备方法。本发明试剂盒与现有试剂盒相比敏感性高、可测定浓度范围宽、试剂有效期长、操作简单、检测自动化程度高等优点。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	天津;12
申请人：	博奥赛斯(天津)生物科技有限公司
发明人：	刘萍;田云霞;张影
专利状态：	有效
申请日期：	2018-01-13T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-23T00:00:00+0800
申请号：	CN201810038444.2
公开号：	CN110044879A
分类号：	G01N21/76(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	300300 天津市东丽区东丽开发区四纬路10号201
主权项：	1.一种CYFRA21-1磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括： 1） CYFRA21-1校准品，浓度为1，5，20，100，300ng/mL； 2）偶联有链霉亲和素的磁微粒悬浮液； 3）生物素标记的CYFRA21-1抗体； 4）CYFRA21-1抗体酶结合物，所用的酶为辣根过氧化物酶，辣根过氧化物酶纯度RZ ≥3.0，活性≥ 250U/mL； 5） CYFRA21-1质控品；质控品包括浓度3ng/mL的低值质控品和200ng/mL的高值质控品； 6）化学发光液A液和B液；A液为5mmol/L， pH8.6的Tris-HCl缓冲液，且该缓冲液中含有终浓度0.7g/L鲁米诺和终浓度0.08g/L对碘酚；B液为0.675g/L过氧化脲； 7） 20倍浓缩洗液； 8）反应管。 2.根据权利要求1所述的CYFRA21-1磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述的磁微粒是表面包裹带有氨基或羧基活性基团的四氧化三铁，粒径10-50nm。 3.根据权利要求1所述的CYFRA21-1磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述的反应管的材料是透明聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯或玻璃。 4.一种制备所述权利要求1-3任一权利要求所述的试剂盒的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）CYFRA21-1校准品的配制：将CYFRA21-1抗原用山羊血清配制成校准品浓储液，以国家校准品进行定标，将浓储液用山羊血清稀释至工作浓度，分别为1，5，20，100，300ng/mL；（2）CYFRA21-1质控品的配制：用山羊血清将上述浓储液分别稀释至3ng/mL和200ng/mL ，并以国家校准品进行定标；将3ng/mL作为低值质控品，200ng/mL作为高值质控品；（3）磁微粒-链霉亲和素悬浮液的制备：配制1L，方法如下：取100mL0.1M MES缓冲液，加入10mg表面联有羧基的磁微粒，室温搅拌40min，之后加入3.5mg链霉亲和素，然后加入8mg/mLEDC溶液，2-8℃反应1h后，用0.01M PBS缓冲液洗涤3次，最后用0.01M PBS定溶至1L即可；（4）生物素标记的CYFRA21-1抗体的制备取0.5mg CYFRA21-1抗体，用硼酸盐缓冲液在2～8℃下透析1～3h；将透析后的抗体加入25ug生物素，同时加入二甲基亚砜，使二甲基亚砜最终质量浓度为5-10%，缓慢振荡，避光反应3h；在上述溶液中加入250uL1M 氯化铵溶液，常温避光反应30-60min；用0.01M PBS溶液在2～8℃下透析2天，期间换液3-5次；（5）CYFRA21-1抗体酶结合物的制备采用改良高碘酸钠氧化法将CYFRA21-1抗体与辣根过氧化物酶进行偶联后，用酶稀释液将其稀释至工作浓度1:5000-8000，并加入15%酶稳定剂，储存于2~8℃；（6）20倍浓缩洗液的配制 20倍浓缩洗液包括58g/L 磷酸氢二钠，5.92g/L磷酸二氢钠，180g/L NaCl，10mL/LTween-20和2% Proclin300；（7）化学发光液A液和B液的配制 A液为0.7g/L鲁米诺，0.08g/L对碘酚，缓冲液为pH8.6的5mmol/L Tris-HCl，避光保存；B液为0.675g/L过氧化脲，用工艺用水配制；A液和B液在使用前5min混合；（8）组装：将上述试剂组装成盒，储存于2~8℃；（9）对采用该方法制备的试剂盒进行物理检查，对准确度、剂量-反应曲线的线性、精密度、特异性、灵敏度、质控品的测定值和稳定性进行测定。
所属类别：	发明专利