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原文传递一种T-2毒素直接竞争化学发光定性定量免疫分析方法

专利名称：	一种T-2毒素直接竞争化学发光定性定量免疫分析方法
摘要：	本发明涉及一种直接竞争化学发光免疫定性定量检测谷物中T‑2毒素的方法。本发明的检测方法包括制备酶标T‑2毒素抗体、直接竞争化学发光免疫检测、建立工作曲线方程和待测谷物样品的T‑2毒素定量检测。本发明中改良的高碘酸钠法采用饱和NaBH4甲醇溶液进行还原反应，克服了NaBH4水溶液极易被氧化、不能长期保存的缺点，从而避免了该溶液现用现配的限制；直接竞争化学发光免疫检测技术提高了检测效率和检测的灵敏度；采用高灵敏的鲁米诺化学发光底物替代传统的TMB底物，极大程度的提高了反应的灵敏度；通过建立工作曲线可以快速、准确的得到样品中T‑2毒素的浓度，降低了检测和计算的复杂程度，适用于广泛的基层检测工作的应用。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山东;37
申请人：	烟台大学
发明人：	李彦伸;袁智鹏;毛馨;尤艳莉
专利状态：	有效
申请日期：	2019-04-26T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-19T00:00:00+0800
申请号：	CN201910343370.8
公开号：	CN110031628A
分类号：	G01N33/58(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	264005 山东省烟台市莱山区清泉路30号
主权项：	1.一种直接竞争化学发光免疫检测T-2毒素的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤： (1)制备抗体标记物辣根过氧化物酶HRP经高碘酸钠活化与T-2毒素抗体进行偶联反应进一步加入NaBH4饱和甲醇溶液，充分进行还原反应后得到辣根过氧化物酶-T-2毒素抗体标记物。 (2)直接竞争化学发光免疫检测将预处理后的样品放置于T-2毒素包被完成的酶标板各孔中，加入步骤(1)制备的抗体标记物，进行直接竞争反应；洗板后各孔加入化学发光底物，测定发光强度。 2.根据权利要求1所述的检测T-2毒素的方法，其特征在于，步骤(1)使用高碘酸钠NaIO4对辣根过氧化物酶HRP进行活化。 3.根据权利要求1所述的检测T-2毒素的方法，其特征在于，步骤(1)活化后的辣根过氧化物酶HRP与T-2毒素抗体IgG进行偶联。 4.根据权利要求1所述的检测T-2毒素的方法，其特征在于，步骤(1)使用NaBH4饱和甲醇溶液对偶联后的酶标T-2毒素抗体进行还原反应。 5.根据权利要求1所述的检测T-2毒素的方法，其特征在于，步骤(2)加样前预处理包括包被、洗涤、密封等步骤；加样后处理包括洗涤步骤，无需间接竞争反应步骤，即可进行发光强度测定。 6.根据权利要求1所述的检测T-2毒素的方法，其特征在于，步骤(2)所述化学发光底物为高灵敏鲁米诺化学发光底物。 7.一种基于权利要求1所述的T-2毒素定量分析方法，其特征在于，所述方法还包括以下步骤： a、建立工作曲线方程对无污染的空白样品进行处理，制备空白基质溶液，以此对标准品进行稀释，得到系列梯度浓度T-2毒素溶液，处理后得到供试溶液；依照权利要求1步骤(2)的方法，测定加标样品的发光强度值。用所获得的每个浓度的标准品溶液的发光强度平均值(B)除以稀释溶液(0标准)的发光强度值(B0)再乘以100％，即百分发光值。百分发光值(％)＝(B/B0)×100％以标准品溶液的浓度(ng/mL)的半对数值为X轴，百分发光值为Y轴，绘制标准曲线图； b、测样品的T-2毒素定量检测称取若干份待测样品，经处理后得到待测溶液，采用权利要求1步骤(2)的方法测定发光强度值，将数值代入步骤a建立的工作曲线方程计算出待测样品中T-2毒素的含量。 8.一种基于权利要求1所述方法的T-2毒素定量分析方法，其特征在于所述方法包括以下样品前处理步骤：然后准确称取2.0g谷物样品，分别置于50mL聚四氟乙烯管中。然后将向每份样品中加入10mL甲醇/PBS(60/40，v/v)溶液，震荡、涡旋提取10min，4℃、9000g离心5min，取5mL上清液加入25mL PBS稀释，过0.45μm水相滤膜，得到待测溶液。
所属类别：	发明专利