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原文传递化妆品中氟喹诺酮类药物直接竞争化学发光定性定量免疫分析方法

专利名称：	化妆品中氟喹诺酮类药物直接竞争化学发光定性定量免疫分析方法
摘要：	本发明涉及化妆品中氟喹诺酮类药物直接竞争化学发光定性定量免疫分析方法。本发明的检测方法包括制备酶标抗氧氟沙星抗体、直接竞争化学发光免疫检测、建立工作曲线方程和待测样品的氧氟沙星定量检测。本发明中改良的高碘酸钠法采用饱和NaBH4甲醇溶液进行还原反应，克服了NaBH4水溶液极易被氧化、不能长期保存的缺点，从而避免了该溶液现用现配的限制；直接竞争化学发光免疫检测技术提高了检测效率和检测的灵敏度；采用高灵敏的鲁米诺化学发光底物替代传统的TMB底物，极大程度的提高了反应的灵敏度；通过建立工作曲线及交叉反应率可以快速、准确的得到氧氟沙星及氟喹诺酮类药物类似物残留的浓度，降低了检测和计算的复杂程度。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山东;37
申请人：	山东省食品药品检验研究院
发明人：	李启艳;王小兵;吴晓云;刁飞燕;李军;李彦伸
专利状态：	有效
申请日期：	2019-04-26T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-05T00:00:00+0800
申请号：	CN201910347297.1
公开号：	CN110412260A
分类号：	G01N33/543(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	250101 山东省济南市高新区新泺大街2749号
主权项：	1.一种直接竞争化学发光免疫检测氧氟沙星的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤： (1)制备抗体标记物辣根过氧化物酶HRP经高碘酸钠活化与抗氧氟沙星抗体进行偶联反应进一步加入NaBH4饱和甲醇溶液，充分进行还原反应后得到辣根过氧化物酶-氧氟沙星抗体标记物； (2)直接竞争化学发光免疫检测将预处理后的样品放置于氧氟沙星包被完成的酶标板各孔中，加入步骤(1)制备的抗体标记物，进行直接竞争反应；洗板后各孔加入化学发光底物，测定发光强度。 2.根据权利要求1所述的检测氧氟沙星的方法，其特征在于，步骤(1)使用高碘酸钠NaIO4对辣根过氧化物酶HRP进行活化。 3.根据权利要求1所述的检测氧氟沙星的方法，其特征在于，步骤(1)活化后的辣根过氧化物酶HRP与氧氟沙星抗体IgG进行偶联。 4.根据权利要求1所述的检测氧氟沙星的方法，其特征在于，步骤(1)使用NaBH4饱和甲醇溶液对偶联后的酶标氧氟沙星抗体进行还原反应。 5.根据权利要求1所述的检测氧氟沙星的方法，其特征在于，步骤(2)加样前预处理包括包被、洗涤、密封等步骤；加样后处理包括洗涤步骤，无需间接竞争反应步骤，即可进行发光强度测定。 6.根据权利要求1所述的检测氧氟沙星的方法，其特征在于，步骤(2)所述化学发光底物为高灵敏鲁米诺化学发光底物。 7.一种基于权利要求1所述方法的氧氟沙星定量分析方法，其特征在于，所述方法还包括以下步骤： a、建立工作曲线方程制备梯度浓度的氧氟沙星标准工作溶液，将上述工作溶液加入若干份样品中制备加标样品，处理后得到供试溶液；依照权利要求1步骤(2)的方法，测定加标样品的发光强度值。用所获得的每个浓度的标准品溶液的发光强度平均值(B)除以稀释溶液(0标准)的发光强度值(B0)再乘以100％，即百分发光值。百分发光值(％)＝(B/B0)×100％以标准品溶液的浓度(ng/mL)的半对数值为X轴，百分发光值为Y轴，绘制标准曲线图； b、待测样品的氧氟沙星定量检测称取若干份待测样品，经处理后得到待测溶液，采用权利要求1步骤(2)的方法测定发光强度值，将数值代入步骤a建立的工作曲线方程计算出待测样品中氧氟沙星的含量。 8.一种基于权利要求1所述方法的氧氟沙星定量分析方法，其特征在于所述方法包括以下样品前处理步骤：准确称取1.0g(或1.0mL)化妆品样品，分别置于50mL聚四氟乙烯管中。然后将向每份样品中加入10mL PBS溶液，震荡、涡旋提取10min，4℃、9000g离心5min，弃去上层脂肪层，取中间层溶液过0.45μm水相滤膜，得到待测溶液。
所属类别：	发明专利