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原文传递 一种基于广谱性抗体识别的蔬菜中农药多残留检测试纸条
专利名称: 一种基于广谱性抗体识别的蔬菜中农药多残留检测试纸条
摘要: 一种基于广谱性抗体识别的蔬菜中农药多残留检测试纸条,该试纸条包括PVC底板、样品垫、金标垫、检测线、质控线、硝基纤维素膜、吸水垫;所述金标垫上包被有胶体金标记的有机磷农药广谱抗体、氨基甲酸酯类广谱抗体和拟除虫菊酯类农药广谱抗体混合物;所述检测线包被有机磷农药通用抗原、氨基甲酸酯类通用抗原及拟除虫菊酯类农药通用抗原;所述质控线上包被兔抗鼠IgG抗体。通过对试纸条的细节因素的把控,接近被检测农药蛋白质的等电点,从而使其与抗原形成更牢固的结合物。该试纸条可对蔬菜、水果等农产品中大部分有机磷农药、氨基甲酸酯类农药及拟除虫菊酯类农药进行检测,现象直观,灵敏度高。
专利类型: 发明专利
国家地区组织代码: 山东;37
申请人: 山东理工大学
发明人: 郭业民;刘晓晗;王楠;董欣茹;郑永辉;刘强;史孝杰;杨青青;孙霞
专利状态: 有效
申请日期: 2019-04-23T00:00:00+0800
发布日期: 2019-07-23T00:00:00+0800
申请号: CN201910329451.2
公开号: CN110045115A
分类号: G01N33/558(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址: 255086 山东省淄博市高新技术开发区高创园A座313室
主权项: 1.一种基于广谱性抗体识别的蔬菜中农药多残留检测试纸条,该试纸条包括PVC底板、样品垫、金标垫、检测线、控制线、硝基纤维素膜、吸水垫,其特征在于:所述样品垫、金标垫、检测线、控制线、硝基纤维素膜、吸水垫均设置在PVC底板的上方,所述样品垫设置在PVC底板的边缘;硝基纤维素膜上靠近金标垫的一端喷涂有检测线,靠近吸水垫的一端喷涂有质控线,从金标垫往吸水垫方向依次为有机磷农药检测线(T1)、氨基甲酸酯类农药检测线(T2)、拟除虫菊酯类农药(T3);所述样品垫和金标垫为玻璃纤维膜,金标垫上包被有胶体金标记的有机磷农药广谱抗体、氨基甲酸酯类广谱抗体和拟除虫菊酯类农药广谱抗体混合物,其中,所述有机磷农药广谱抗体、氨基甲酸酯类广谱抗体和拟除虫菊酯类农药广谱抗体偶联到 20 ~ 25nm 氯金酸胶体颗粒表面所得;所述检测线包被有机磷农药通用抗原、氨基甲酸酯类通用抗原及拟除虫菊酯类农药通用抗原;所述控制线上包被兔抗鼠IgG抗体;所述有机磷农药通用半抗原如式1所示,所述氨基甲酸酯类通用半抗原如式2所示,所述拟除虫菊酯类通用半抗原如式 3所示: 所述有机磷通用半抗原如式1所示: 所述氨基甲酸酯类通用半抗原如式2所示: 所述拟除虫菊酯类通用半抗原如式3所示: 。 2.根据权利要求 1 所述的基于广谱性抗体识别的蔬菜中农药多残留检测试纸条,其特征在于,所述样品垫、金标垫、硝基纤维素膜和吸水垫之间设有1~1.5mm的重叠区;所述检测线之间,检测线和质控线间隔0.5~0.8cm。 3.根据权利要求 1 所述的基于广谱性抗体识别的蔬菜中农药多残留检测试纸条,其特征在于,所述底板为 PVC 板,所述反应膜为硝酸纤维素膜,所述样品垫由玻璃纤维膜或滤纸制成,所述吸水纸由滤纸制成。 4.根据权利要求 1 所述的基于广谱性抗体识别的蔬菜中农药多残留检测试纸条,其特征在于,所述有机磷农药金标广谱抗体的标金量、氨基甲酸酯类农药金标广谱抗体的标金量、拟除虫菊酯类农药金标广谱抗体的标金量是 15 ~ 25μg/mL,金标垫上包被的有机磷农药金标宽谱抗体的浓度为、氨基甲酸酯类农药金标宽谱抗体的浓度为、拟除虫菊酯类农药金标宽谱抗体的浓度为 15 ~ 25μg/mL。 5.根据权利要求 1 所述的基于广谱性抗体识别的蔬菜中农药多残留检测试纸条,其特征在于,有机磷农药、氨基甲酸酯类农药、拟除虫菊酯类农药广谱抗体偶联到氯金酸胶体颗粒表面时,所用氯金酸胶体颗粒溶液中加入的碳酸钾溶液(0.1mol/L)为9μL/mL。 6.如权利要求1所述的基于广谱性抗体识别的蔬菜中农药多残留检测试纸条的制备方法,其特征在于包括以下步骤: (1)制备通用半抗原-载体蛋白偶联物:将有机磷农药通用半抗原、氨基甲酸酯类农药通用半抗原、拟除虫菊酯类农药通用半抗原分别与血蓝蛋白或甲状腺蛋白进行偶联,分别制备通用半抗原偶联物; (2)制备有机磷农药、氨基甲酸酯类农药通用抗体和拟除虫菊酯类农药通用抗体:将通用半抗原偶联物多次免疫小鼠,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞在体外进行融合,制备杂交瘤细胞,将阳性杂交瘤细胞注入小鼠腹腔收集腹水,或以体外细胞培养的收集上清液的方式制备有机磷农药通用抗体、氨基甲酸酯类农药通用抗体和拟除虫菊酯类通用抗体; (3)制备胶体金:以柠檬酸三钠还原法制备胶体金,胶体金颗粒直径在20~25nm之间; (4)胶体金标记抗体:将胶体金溶液分别与有机磷农药通用抗体、氨基甲酸酯类农药通用抗体和拟除虫菊酯类通用抗体按相应比例混匀,通过离心纯化、浓缩,制备成胶体金标记的有机磷、氨基甲酸酯和拟除虫菊酯类农药通用抗体混合物; (5)将胶体金标记的有机磷、氨基甲酸酯和拟除虫菊酯类农药通用抗体混合物喷涂并固定在金标垫上,将有机磷半抗原偶联物包被在靠近样品垫端的检测线T1上,将氨基甲酸酯半抗原偶联物包被在检测线T2上,将兔抗鼠IgG抗体包被在质控线上,并充分干燥; (6)将硝基纤维素膜、金标垫、样品垫、吸水垫依次粘合在PVC底板上,切成条状,即制成检测有机磷、氨基甲酸酯和拟除虫菊酯类农药残留的胶体金免疫层析试纸条。 7.如权利要求1所述的基于广谱性抗体识别的蔬菜中农药多残留检测试纸条的使用方法,包括如下步骤 : 1) 待测样品的前处理:若待测样品为液体物质时,可直接取待测样品检测 ; 若待测样品为固体物质时,将待测样品磨碎,加入样品处理液,静置后检测 ;其中,所述样品处理液为磷酸盐缓冲液 ; 2) 检测 : 将所取样品加到样品垫上,样品在毛细作用下沿着样品垫迁移,室温作用 5 ~ 10min,观察结果。 8.结果判断: (1)阴性:质控线、三条检测线均呈现红色条带,说明样本中有机磷类农药、氨基甲酸酯类农药、拟除虫菊酯类农药残留均不超标; (2)阳性1:质控线呈现红色条带,检测线1、2、3均不呈现红色条带或颜色浅于质控线,说明样本中有机磷类农药、氨基甲酸酯类农药、拟除虫菊酯类农药残留超标; (3)阳性2:质控线与检测线1、3呈现红色条带,检测线2不呈现红色条带或颜色浅于质控线,说明样本中氨基甲酸酯类农药残留超标,有机磷类及菊酯类农药残留均不超标; (4)阳性3:质控线与检测线2呈现红色条带,检测线1、3均不呈现红色条带或颜色浅于质控线,说明样本中有机磷类农药、菊酯类农药残留超标,氨基甲酸酯类农药残留不超标; (5)失效:质控线、检测线均不呈现红色条带或仅有检测线呈现红色条带,说明试纸条失效。
所属类别: 发明专利
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