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原文传递一种检测人体可溶性去唾液酸糖蛋白受体的方法

专利名称：	一种检测人体可溶性去唾液酸糖蛋白受体的方法
摘要：	本发明公开了一种检测人体可溶性去唾液酸糖蛋白受体的方法，属于免疫学检测领域。本发明提供了一种经济、快速、准确、实用性高用于检测人体sASGPR的ELISA法。该方法基于ASGPR的特异性配体与ASGPR之间的特异性识别，选取半乳糖基化人血清白蛋白(GSA)作为ASGPR的特异性配体，GSA由人血清白蛋白制备得来，具有价格便宜、容易制备、易于保存等优点，且该方法的检测限度适用于人血清样品中sASGPR的检测，不需要使用特殊、大型仪器设备，在普通实验室即可开展，具有特异性高、稳定性好、操作简便、费用低廉等优势，为临床肝功能评估提供一定的参考价值。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	江南大学
发明人：	胡静;尹健;施奇敏
专利状态：	有效
申请日期：	2019-04-17T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-23T00:00:00+0800
申请号：	CN201910308241.5
公开号：	CN110045129A
代理机构：	哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司
代理人：	刘景祥
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	214000 江苏省无锡市蠡湖大道1800号
主权项：	1.一种检测人体可溶性去唾液酸糖蛋白受体的方法，其特征在于，以半乳糖基化人血清白蛋白作为ASGPR的特异性配体，应用ELISA法进行检测。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法具体为：用CBS缓冲液稀释的GSA包被酶标板，4℃包被12～24h，随后用洗涤缓冲液洗涤；在包被好的酶标板中加入封闭液，35～37℃封闭1.5～2.5h；弃封闭液，用洗涤缓冲液洗涤；向酶标板中加入样品，35～37℃孵育2～2.5h，随后用洗涤缓冲液洗涤，拍干；加入ASGPR1一抗35～37℃孵育2～2.5h，随后洗涤缓冲液洗涤；加入HRP标记的羊抗鼠酶标二抗，35～37℃孵育1～2h，洗涤缓冲液洗涤；用TMB显色液显色，避光孵育10～20min，随后立即用H2SO4终止显色；测定450nm处吸光度。 3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述CBS缓冲液的浓度为0.03～0.08M。 4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述GSA的包被浓度为15～25μg/mL。 5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述ASGPR一抗购自Santa CruzBiotechnology，货号为sc-166633；所述酶标二抗稀释2000倍后添加；所述酶标二抗购自康为世纪生物科技有限公司，货号为CW0102。 6.一种检测人体可溶性去唾液酸糖蛋白受体的试剂盒，其特征在于，包括经GSA包被的酶标板、封闭液、ASGPR标准品、ASGPR一抗、羊抗鼠酶标二抗、终止液和洗涤缓冲液。 7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述洗涤缓冲液包括第一洗涤缓冲液和第二洗涤缓冲液；所述第一洗涤缓冲液为PBS缓冲液；所述第二洗涤缓冲液为PBST缓冲液。 8.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述封闭液是脱脂牛奶和PBST缓冲液的混合物；所述终止液为H2SO4溶液。 9.权利要求1～5任一所述方法在检测肝功能指标中的应用。 10.权利要求6～8任一所述的试剂盒在生物、医学检测领域中的应用。
所属类别：	发明专利