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原文传递一种快速检测孕妇可溶性血管内皮生长因子受体-1的免疫层析检测卡及其制备方法

专利名称：	一种快速检测孕妇可溶性血管内皮生长因子受体-1的免疫层析检测卡及其制备方法
摘要：	本发明涉及一种快速检测孕妇可溶性血管内皮生长因子受体‑1的免疫层析检测卡，包括试纸条，包括试纸条，所述试纸条包括检测线及质控线，所述检测线上包被有一株鼠抗人sFlt‑1单克隆抗体，所述质控线上包被有羊抗兔多克隆抗体。本发明所提供的快速检测孕妇可溶性血管内皮生长因子受体‑1的免疫层析检测卡，其可用于血清、血浆和全血的检测，以用于预测子痫前期相关疾病的诊断。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	天津;12
申请人：	天津华科泰生物技术有限公司
发明人：	林斯;张衡;韩艳华
专利状态：	有效
申请日期：	2019-09-26T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-22T00:00:00+0800
申请号：	CN201910917627.6
公开号：	CN110488005A
代理机构：	北京汇泽知识产权代理有限公司
代理人：	李岩
分类号：	G01N33/558(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	300000 天津市北辰区天津北辰经济技术开发区医药园京福公路东侧优谷新科园
主权项：	1.一种快速检测孕妇可溶性血管内皮生长因子受体-1的免疫层析检测卡，包括试纸条，所述试纸条包括检测线及质控线，其特征在于，所述检测线上包被有一株鼠抗人sFlt-1单克隆抗体，所述质控线上包被有羊抗兔多克隆抗体。 2.如权利要求1所述的快速检测孕妇可溶性血管内皮生长因子受体-1的免疫层析检测卡，其特征在于，所述试纸条还包括PVC板，所述PVC板上固定有依次连接的样品垫、标记物垫、包被垫及吸水垫，所述包被垫上依次设有检测线及质控线，所述样品垫和标记物垫连接为一体。 3.如权利要求2所述的快速检测孕妇可溶性血管内皮生长因子受体-1的免疫层析检测卡，其特征在于，所述包被垫靠近检测线的一端连接有标记物垫，靠近质控线的一端连接有吸水垫。 4.如权利要求3所述的快速检测孕妇可溶性血管内皮生长因子受体-1的免疫层析检测卡，其特征在于，所述标记物垫上包被有另一株鼠抗人sFlt-1单克隆抗体标记的表面活化的荧光乳胶微球和兔IgG标记的表面活化的荧光乳胶微球，所述另一株鼠抗人sFlt-1单克隆抗体标记的表面活化的荧光乳胶微球和兔IgG标记的表面活化的荧光乳胶微球的摩尔比为1:0.2～4。 5.如权利要求4所述的快速检测孕妇可溶性血管内皮生长因子受体-1的免疫层析检测卡，其特征在于，所述快速检测可溶性血管内皮生长因子受体-1的免疫层析检测卡还包括用于卡设试纸条的卡壳。 6.如权利要求5所述的快速检测孕妇可溶性血管内皮生长因子受体-1的免疫层析检测卡，其特征在于，所述卡壳包括：底槽，其连接于所述PVC板；上盖，其连接于所述底槽，所述上盖上设置有用于向所述样品垫上加样的加样孔；观察窗，其设置于上盖上并用于检测线和质控线的数据采集。 7.一种权利要求1-6任一项所述的快速检测孕妇可溶性血管内皮生长因子受体-1的免疫层析检测卡的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： 1)包被垫的制备：将一株鼠抗人sFlt-1单克隆抗体和羊抗兔多克隆抗体分别包被到硝酸纤维素膜上，干燥备用； 2)标记物垫的制备：将另一株鼠抗人sFlt-1单克隆抗体标记的表面活化的荧光乳胶微球和兔IgG标记的表面活化的荧光乳胶微球混合后，喷涂在玻璃纤维素膜上，干燥备用； 3)组装试纸条：在PVC板上粘接包被垫，并在靠近该包被垫上的质控线的一端搭接吸水垫，在靠近该包被垫上的检测线的一端搭接标记物垫及其连接的样品垫；然后将其切成所需宽度的试纸条，之后将该试剂条放入卡壳。 8.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述表面活化的荧光乳胶微球通过以下步骤制得： 1)取表面活性剂加入0.1～0.5mol/L，pH值为8～10的硼酸-硼砂缓冲溶液中，再加入二甲基甲酰胺、N,N’-二环己基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺，搅拌反应；所述硼酸-硼砂缓冲溶液包含0.5wt％～3wt％的PEG2000； 2)取表面带有羧基的荧光乳胶微球的分散液，以硼酸-硼砂缓冲溶液调pH至8～10后，加入到步骤1)所得的产物中，在25℃下搅拌反应1～5h，反应完毕后，离心去除上清液，得到表面活化的荧光乳胶微球，用硼酸-硼砂缓冲溶液复溶备用；所述硼酸-硼砂缓冲溶液包含0.5wt％～3wt％的PEG2000。 9.如权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述表面活性剂包含有N，N'-双月桂酰基乙二胺二丙烯酸钠、聚乙二醇单月硅酸酯、十二烷基苯磺酸盐和月桂酰谷氨酸盐，四者的重量比为(0.5～6):(4～9):(0.8～3):(5～14)；所述表面活性剂与所述氨基表面的荧光乳胶微球的重量比为(0.5～120):1。 10.如权利要求8或9所述的制备方法，其特征在于，所述另一株鼠抗人sFlt-1单克隆抗体标记的表面活化的荧光乳胶微球通过以下步骤制得：取表面活化的荧光乳胶微球加入碳化二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺中室温搅拌2～6h，然后加入另一株鼠抗人sFlt-1单克隆抗体，室温下搅拌1～4h，再加入10～50mg BSA封闭液，继续搅拌1～4h；在2～8℃下，离心，除去上清液；最后，用0.01M～0.5M，pH＝7.4的磷酸盐缓冲溶液将固体沉淀物复溶，再加入Proclin300在4℃下保存待用；其中，所述表面活化的荧光乳胶微球与另一株鼠抗人sFlt-1单克隆抗体的质量比例为1：(0.01～4)。
所属类别：	发明专利