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原文传递血管内皮生长因子化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法

专利名称：	血管内皮生长因子化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法
摘要：	本发明涉及一种血管内皮生长因子化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法，属于试剂盒技术领域。解决了现有的检测血管内皮生长因子的方法操作繁琐、检测时间长、自动化程度低、受人为因素影响大、灵敏度低、重复性差的问题。本发明的试剂盒，包括R1试剂、R2试剂和R3试剂；R1试剂包含链霉亲和素磁颗粒和缓冲液Ⅰ；R2试剂包括化学发光标记物标记的血管内皮生长因子单克隆抗体和缓冲液Ⅱ；R3试剂包括偶联标记物标记的血管内皮生长因子单克隆抗体和缓冲液Ⅲ。该试剂盒操作简单、检测时间短、自动化程度高、不受人为因素影响、灵敏度高、重复性好、抗干扰性好、检测范围宽、热稳定性好。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	吉林;22
申请人：	迪瑞医疗科技股份有限公司
发明人：	李磊;李冬梅;孙成艳;高威;何浩会
专利状态：	有效
申请日期：	2019-04-17T00:00:00+0800
发布日期：	2019-08-02T00:00:00+0800
申请号：	CN201910308294.7
公开号：	CN110082537A
代理机构：	长春众邦菁华知识产权代理有限公司
代理人：	王莹
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	130103 吉林省长春市高新区宜居路3333号
主权项：	1.血管内皮生长因子化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，包括R1试剂、R2试剂和R3试剂；所述R1试剂包括链霉亲和素磁颗粒和缓冲液Ⅰ；所述R2试剂包括化学发光标记物标记的血管内皮生长因子单克隆抗体和缓冲液Ⅱ；所述R3试剂包括偶联标记物标记的血管内皮生长因子单克隆抗体和缓冲液Ⅲ。 2.根据权利要求1所述的血管内皮生长因子化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述R1试剂中链霉亲和素磁颗粒的质量百分浓度为0.01％～1％；所述R2试剂中化学发光标记物标记的血管内皮生长因子单克隆抗体的浓度为≥0.1μg/mL；所述R3试剂中偶联标记物标记的血管内皮生长因子单克隆抗体的浓度为≥0.7μg/ml。 3.根据权利要求2所述的血管内皮生长因子化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述R1试剂中链霉亲和素磁颗粒的质量百分浓度为0.05％～0.072％；所述R2试剂中化学发光标记物标记的血管内皮生长因子单克隆抗体的浓度为0.1～1.0μg/mL；所述R3试剂中偶联标记物标记的血管内皮生长因子单克隆抗体的浓度为0.7～2.0μg/ml。 4.根据权利要求1所述的血管内皮生长因子化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述链霉亲和素磁颗粒的粒径为0.05～3μm。 5.根据权利要求1所述的血管内皮生长因子化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述化学发光标记物标记的血管内皮生长因子单克隆抗体中，血管内皮生长因子单克隆抗体与化学发光标记物的摩尔比为1:(1～20)，所述化学发光标记物为吖啶酯、鲁米诺、异鲁米诺和三联吡啶钌。 6.根据权利要求1所述的血管内皮生长因子化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述偶联标记物标记的血管内皮生长因子单克隆抗体中，血管内皮生长因子单克隆抗体与偶联标记物的摩尔比为1:(1～20)，所述偶联标记物为生物素。 7.根据权利要求1所述的血管内皮生长因子化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述缓冲液Ⅰ、缓冲液Ⅱ和缓冲液Ⅲ均为含有0.05％～0.1％的表面活性剂、0.01％～0.1％的防腐剂和50-400mM的缓冲盐，pH为6.0-7.2的缓冲液。 8.根据权利要求1所述的血管内皮生长因子化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒还包括化学发光底物液，所述化学发光底物液包括A液和B液；A液为过氧化氢溶液和硝酸溶液，B液为氢氧化钠溶液。 9.根据权利要求1所述的血管内皮生长因子化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒还包括血管内皮生长因子校准品，校准品包括浓度分别为0.00ng/mL、10ng/mL、50ng/mL、250ng/mL、500ng/mL和1000ng/mL的血管内皮生长因子的溶液。 10.权利要去1～9任何一项所述的血管内皮生长因子化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、将链霉亲和素磁颗粒溶液和TBST溶液混匀后，放置在磁分离器上，直至上清液无混浊，弃上清，留取磁颗粒，以缓冲液Ⅰ清洗后在缓冲液Ⅰ中配成固相试剂，即为R1试剂；步骤二、将血管内皮生长因子单克隆抗体放入离心管中离心，然后加入碳酸缓冲液，混匀后加入化学发光标记物溶液离心，将离心管密封后放入避光暗盒中，然后将暗盒放入气浴恒温振荡器中混匀，加入封闭液，放入气浴恒温振荡器中混匀，将封闭好的抗体经过纯化、收集，用缓冲液Ⅱ稀释，得到R2试剂；步骤三、将血管内皮生长因子单克隆抗体放入离心管中离心，然后加入TRIS缓冲液，混匀后加入偶联标记物溶液离心，反应后，加入赖氨酸，继续反应，最后将反应液用脱盐柱纯化、收集后，用缓冲液Ⅲ稀释，得到R3试剂。
所属类别：	发明专利