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原文传递血管内皮生长因子检测试剂盒及其使用方法和应用

专利名称：	血管内皮生长因子检测试剂盒及其使用方法和应用
摘要：	本发明涉及一种血管内皮生长因子检测试剂盒及其使用方法和应用。该血管内皮生长因子检测试剂盒包括第一连接物连接的第一抗体片段、第二连接物包被的磁珠和发光标记物标记的第二抗体片段。该血管内皮生长因子检测试剂盒中用于与血管内皮生长因子特异性结合的第一抗体片段与第二抗体片段中至少一个为血管内皮生长因子抗体的Fab片段，较之传统的IgG全片段抗体，可有效避免Fc片段的非特异性结合，因而检测特异性可显著提高；使用磁珠可以增大反应的灵敏度，并可进行独立单人份检测；使用直接化学发光标记物进行抗体片段标记，在检测时，无需加入酶促反应试剂，因而所需的检测时间短，检测效率高。该检测试剂盒易于制作，可广泛推广使用。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山东;37
申请人：	威海威高生物科技有限公司
发明人：	姚继承;刘海光;吴晗琪;王婷婷;赵海英;饶志明
专利状态：	有效
申请日期：	2019-06-06T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-06T00:00:00+0800
申请号：	CN201910491589.2
公开号：	CN110208543A
代理机构：	广州华进联合专利商标代理有限公司
代理人：	林青中;郑彤
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	264200 山东省威海市环翠区世昌大道312号
主权项：	1.一种血管内皮生长因子检测试剂盒，其特征在于，包括第一连接物连接的第一抗体片段、第二连接物包被的磁珠和发光标记物标记的第二抗体片段；所述第一连接物与所述第二连接物能够特异性结合；所述第一抗体片段和/或所述第二抗体片段为血管内皮生长因子抗体的Fab片段，且所述第一抗体片段与所述第二抗体片段与血管内皮生长因子特异性结合的位点不同；所述发光标记物为直接化学发光标记物。 2.如权利要求1所述的血管内皮生长因子检测试剂盒，其特征在于，所述第一连接物为异硫氰酸荧光素，所述第二连接物为抗异硫氰酸荧光素抗体；所述第一连接物与所述第一抗体片段的氨基端连接；所述第二连接物的氨基端与所述磁珠表面固定的羧基连接。 3.如权利要求1所述的血管内皮生长因子检测试剂盒，其特征在于，Fab片段的第一抗体片段和/或第二抗体片段是在酸性条件下使用胃蛋白酶消化处理血管内皮生长因子单克隆抗体，过柱分离后使用还原剂还原得到的。 4.如权利要求3所述的血管内皮生长因子检测试剂盒，其特征在于，所述血管内皮生长因子单克隆抗体与所述胃蛋白酶的质量比为1:0.04；和/或消化处理的温度为37℃，时间为6h～24h；和/或所述还原剂为巯基乙醇。 5.如权利要求1所述的血管内皮生长因子检测试剂盒，其特征在于，所述发光标记物为金刚烷、鲁米诺、异鲁米诺或吖啶酯。 6.如权利要求1～5中任一项所述的血管内皮生长因子检测试剂盒，其特征在于，所述第一连接物与第一抗体片段的质量比为1:50，每毫克所述磁珠表面连接有20μg所述第二连接物，所述发光标记物与所述第二抗体片段的质量比为10:1。 7.如权利要求1～5中任一项所述的血管内皮生长因子检测试剂盒，其特征在于，还包括校准品溶液、稀释用缓冲液、清洗液和发光底物溶液中的至少一种。 8.一种权利要求1～7中任一项所述的血管内皮生长因子检测试剂盒的使用方法，其特征在于，包括如下步骤：将所述第一连接物连接的第一抗体片段、所述第二连接物包被的磁珠与待测样本混合，孵育反应后洗涤，加入所述发光标记物标记的第二抗体片段，孵育反应后二次洗涤，加入发光底物溶液，测量光强度。 9.如权利要求8所述的使用方法，其特征在于，所述两次孵育反应的温度是37℃，时间是10min；和/或所述第一连接物连接的第一抗体片段的浓度为1μg/ml，所述第二连接物包被的磁珠的浓度为1mg/ml，所述发光标记物标记的第二抗体片段浓度为0.5μg/ml，所述第一连接物连接的第一抗体片段、所述第二连接物包被的磁珠以及所述发光标记物标记的第二抗体片段的加入体积比为100μl:20μl:200μl。 10.如权利要求1～7中任一项所述的血管内皮生长因子检测试剂盒在使用化学发光分析仪检测中的应用。
所属类别：	发明专利