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原文传递用于筛选LRPPRC调控剂的产品及鉴定LRPPRC调控剂的方法

专利名称：	用于筛选LRPPRC调控剂的产品及鉴定LRPPRC调控剂的方法
摘要：	本发明实施例公开了一种用于筛选LRPPRC调控剂的产品及鉴定LRPPRC调控剂的方法，包括试剂盒和装置，试剂盒包括重组LRPPRC蛋白、GST蛋白、荧光素标记的核酸适配体R14、以及荧光素标记的对照核酸；装置包括多孔板和荧光偏振信号检测仪。本发明实施例使用短的核酸适配体，核酸适配体相比天然存在的RNA及DNA序列来讲具有更加短的序列与分子量，这保证了筛选过程中偏振信号检测窗口足够大，使得检测信噪比有很好的保证；无需预先对目标蛋白进行精细的晶体结构分析，可以极大的降低了药物筛选的门槛；该筛选方法对于核酸结合蛋白具有很好的通用性，极易推广。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	中国科学院化学研究所
发明人：	方晓红;周卫;徐丽;张振;赵立波
专利状态：	有效
申请日期：	2019-04-25T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-26T00:00:00+0800
申请号：	CN201910340208.0
公开号：	CN110058014A
代理机构：	北京辰权知识产权代理有限公司
代理人：	佟林松
分类号：	G01N33/535(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	100190 北京市海淀区中关村北一街2号
主权项：	1.一种用于筛选LRPPRC调控剂的产品，其特征在于，包括试剂盒和装置，所述试剂盒包括重组LRPPRC蛋白、GST蛋白、荧光素标记的核酸适配体R14、以及荧光素标记的对照核酸；所述装置包括多孔板和荧光偏振信号检测仪。 2.如权利要求1所述用于筛选LRPPRC调控剂的产品，其特征在于，所述重组LRPPRC的浓度与GST蛋白浓度相同，均为14-136μg/mL，优选68-120μg/mL。 3.如权利要求1所述用于筛选LRPPRC调控剂的产品，其特征在于，所述核酸适配体R14的序列为GGTGGGTGGGTTGGGTGG，所述对照核酸的序列为AATTTTTTAATTATTTATATTA；所述荧光标记的核酸适配体R14与荧光标记的对照核酸浓度相同，储备液浓度均为100nM，工作液浓度均为10-8M。 4.如权利要求1所述用于筛选LRPPRC调控剂的产品，其特征在于，所述荧光偏振信号检测仪是酶标仪，优选Infinite M1000 PRO plate reader酶标仪。 5.如权利要求1-4任一项所述用于筛选LRPPRC调控剂的产品，其特征在于，所述产品用于筛选LRPPRC蛋白负调控剂或C端结合剂。 6.一种基于荧光偏振信号检测鉴定LRPPRC调控剂的方法，其特征在于，包括以下步骤： 1)原核表达纯化LRPPRC蛋白和GST蛋白； 2)合成荧光素标记的核酸适配体R14和荧光标记对照核酸，所述对照核酸的序列为AATTTTTTAATTATTTATATTA； 3)分别将LRPPRC蛋白与荧光标记的核酸适配体R14混合、将LRPPRC蛋白与荧光标记对照核酸混合、将荧光标记的核酸适配体R14与GST蛋白混合，加入多孔板不同的孔中； 4)向各孔中加入候选分子； 5)以荧光偏振信号检测仪检测步骤3)中各混合物的荧光偏振信号。 7.如权利要求6所述基于荧光偏振信号检测鉴定LRPPRC调控剂的方法，其特征在于，所述步骤3)进一步包括DMSO空白对照。 8.如权利要求6所述基于荧光偏振信号检测鉴定LRPPRC调控剂的方法，其特征在于，所述LRPPRC、GST蛋白的反应浓度均为120μg/mL，所述荧光标记的核酸适配体R14、荧光标记对照核酸的反应浓度均为40nM；所述候选分子的工作浓度为24μM。 9.如权利要求6-8任一项所述基于荧光偏振信号检测鉴定LRPPRC调控剂的方法，其特征在于，采集所述孔板上每个孔的荧光信号以及偏振光信号；与DMSO孔的信号进行归一化处理，加入小分子化合物后，所述孔的偏振光信号的抑制率大于50％；且荧光信号自身的变化小于1.5倍的小分子化合物，即为LRPPRC负调控剂。 10.如权利要求6-8任一项所述基于荧光偏振信号检测鉴定LRPPRC调控剂的方法，其特征在于，所述方法为高通量筛选方法。
所属类别：	发明专利