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原文传递可重复修饰的用于检测肿瘤细胞的生物传感器及其制备法

专利名称：	可重复修饰的用于检测肿瘤细胞的生物传感器及其制备法
摘要：	本发明为一种可重复修饰的用于检测肿瘤细胞的生物传感器及其制备法。四面体‑适配体通Au‑S键自主装固定于金电极上，从而高效、特异地捕获人乳腺癌细胞。随后将合成的PCN‑224‑Pt/辣根过氧化物酶/双适配体/血红素/G‑四联体新型金属有机框架纳米探针通过适配体与细胞的结合引入到细胞传感界面上，通过辣根过氧化物酶、纳米酶(Pt纳米颗粒)和DNA酶(血红素/G‑四联体)三种酶催化过对苯二酚(HQ)‑过氧化氢(H2O2)。本发明可用于肿瘤细胞的检测，具有高选择性、高灵敏度和简便快速、电极可反复修饰等优点。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广东;44
申请人：	中山大学
发明人：	陈缵光;欧丹;孙端平
专利状态：	有效
申请日期：	2018-12-24T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-26T00:00:00+0800
申请号：	CN201811629125.5
公开号：	CN110057877A
分类号：	G01N27/26(2006.01);G;G01;G01N;G01N27
申请人地址：	510275 广东省广州市新港西路135号
主权项：	1.一种可重复修饰的用于检测肿瘤细胞的生物传感器，其特征在于，以金电极作为检测界面，四面体连接双适配体通过金硫键结合在金电极表面，纳米探针通过适配体捕获细胞而连接到细胞传感界面。 2.根据权利要求1所述的一种可重复修饰的用于检测肿瘤细胞的生物传感器，其特征在于，四面体连接双适配体(AS1411-A和MUC1-A)通过金硫键结合在金电极表面。 3.根据权利要求1或2所述的一种可重复修饰的用于检测肿瘤细胞的生物传感器，其特征在于，适配体MUC1和AS1411的比例1∶1时最佳。 4.根据权利要求1所述的一种可重复修饰的用于检测肿瘤细胞的生物传感器，其特征在于，纳米探针集合新型金属有机框架PCN-224-Pt、辣根过氧化物酶、双适配体、血红素、G-四联体于一体。 5.一种可重复修饰的用于检测肿瘤细胞的生物传感器的制备法，其特征在于，包括以下步骤： (1)金电极的前处理：金电极首先用食人鱼洗液浸泡15分钟，然后置于打磨布上进行打磨，超声处理后，再用0.5M的硫酸活化直到信号稳定； (2)四面体连接的适配体的固定：分别取10μM的四面体单链连接的适配体AS1411-A、四面体单链AS1411-B、AS1411-C和AS1411-D于四支PCR管中，各加入等体积1mM的三氯乙基磷酸酯，反应1h。上述溶液均混合于同一PCR管中，于95℃条件下反应10min，马上降温至4℃条件下反应10min，可得四面体连接的适配体AS1411三维结构。四面体连接的适配体MUC1三维结构用MUC1-A、MUC1-B、MUC1-C和MUC1-D同法可得。取10μL两种适配体溶液滴加到前处理过的金电极，于37℃条件下反应3h。两种适配体通过Au-S键自主装固定于金电极上，可高效、特异性地捕获人乳腺癌细胞MCF-7；所述的AS1411三维结构的四面体单链连接的适配体AS1411-A的序列为：5’-ACA TTCCTA AGT CTG AAA CAT TAC AGC TTG CTA CAC GAG AAG AGC CGC CAT AGT ATT TTT TTTTTG GTG GTG GTG GTT GTG GTG GTG GTG G-3’；所述的MUC1三维结构的的四面体单链连接的适配体MUC1-A的序列为：5’-ACA TTC CTAAGT CTG AAA CAT TAC AGC TTG CTA CAC GAG AAG AGC CGC CAT AGT ATT TTT TTT TTGCAG TTG ATC CTT TGG ATA CCC TGG-3’；所述的AS1411三维结构和MUC1三维结构的四面体单链B的序列为：5’-HS-TAT CAC CAGGCA GTT GAC AGT GTA GCA AGC TGT AAT AGA TGC GAG GGT CCA ATA C-3’；所述的AS1411三维结构和MUC1三维结构的四面体单链C的序列为：5’-HS-TCA ACT GCCTGG TGA TAA AAC GAC ACT ACG TGG GAA TCT ACT ATG GCG GCT CTT C-3’；所述的AS1411三维结构和MUC1三维结构的四面体单链D的序列为：5’-HS-TTC AGA CTTAGG AAT GTG CTT CCC ACG TAG TGT CGT TTG TAT TGG ACC CTC GCA T-3’； (3)多功能纳米探针的固定：随后将合成的DNA酶(G-四联体/血红素)-双适配体-PCN-224-Pt颗粒-辣根过氧化物酶纳米探针引入到不同细胞浓度的传感界面上，于37℃反应1小时。随后将电极置于含有3mM对苯二酚和1.5mM过氧化氢的PBS溶液中，反应5分钟，然后进行差示脉冲伏安法扫描；所述的AS1411适配体的序列为：5’-HS-(CH2)6-TTTGGGTAGGGCGGGTTGGG-TTTTTT-GGTGGTGGTGGTTGTGGTGGTGGTGG-3’；所述的MUC1适配体的序列为：5’-HS-(CH2)6-TTTGGGTAGGGCGGGTTGGG-TTTTTT-GCAGTTGATCCTTTGGATACCCTGG-3’； (4)金电极的重复修饰：实验结束后，外加电压-1.7～-0.9V破坏Au-S键并重新生成裸的金电极表面，用于重新、反复修饰。 6.根据权利要求5所述的可重复修饰的用于检测肿瘤细胞的生物传感器的制备法，其特征在于，步骤(3)所述的不同细胞浓度为20，1×102，1×103，1×104，1×105，1×106和1×107cells/mL。 7.根据权利要求5所述的可重复修饰的用于检测肿瘤细胞的生物传感器的制备法，其特征在于，步骤(4)所述的缓冲液：10mM PBS(pH 7.4)，扫描速度：50mV/s，扫描范围：-0.9～-1.7V。
所属类别：	发明专利