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原文传递一种三磷酸腺苷荧光检测水产品新鲜度的方法

专利名称：	一种三磷酸腺苷荧光检测水产品新鲜度的方法
摘要：	本发明涉及食品质量分析领域，具体来说是一种检测水产品新鲜度的方法。步骤包括：样品预处理，金属有机框架/铜纳米团簇、水产品上清液以及Tris‑HCl缓冲液混合孵育，通过测定其荧光发射强度，并将强度值代入线性方程，确定ATP的浓度范围。本发明合成的复合材料低毒无污染、成本低、简单易得，用于检测ATP，具有灵敏度高，抗干扰能力强，方法简便易操作以及可实现快速检测等优点，在优化后的最佳实验条件下，可以准确快速地实现水产品中ATP含量的检测,并以此作为水产品质鲜度的评价指标。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山东;37
申请人：	烟台大学
发明人：	庄旭明;高雪情;刘惠涛;栾锋;刘佳;田春媛
专利状态：	有效
申请日期：	2019-06-24T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-26T00:00:00+0800
申请号：	CN201910547473.6
公开号：	CN110057805A
代理机构：	北京中济纬天专利代理有限公司
代理人：	马国冉
分类号：	G01N21/64(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	264005 山东省烟台市莱山区清泉路30号
主权项：	1.一种腺苷三磷酸荧光检测水产品新鲜度的方法，其特征在于，步骤包括：（1）将水产品肉质经破碎、调pH至7.4，Tris-HCl缓冲液定容后,以8000转/min离心5min，滤膜过滤后获得上清液；（2）将步骤（1）得到的上清液1mL加入到1–2 mL 金属有机框架/铜纳米团簇CuNCs/ZIF-90水溶液中，混匀后加入1 mL的Tris-HCl缓冲液；在25–37℃温度下孵育5–30分钟；在365nm的激发波长下测定其荧光发射强度，并将强度值代入线性关系式，确定腺苷三磷酸ATP的浓度范围；（3）根据腺苷三磷酸ATP的浓度大小判断水产品新鲜度：浓度越高，水产品越新鲜。 2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的水产品为海水鱼、爬虾或青虾。 3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的金属有机框架/铜纳米团簇CuNCs/ZIF-90的合成方法为：称取0.5960 g Zn(NO3)2· 6H2O和0.0961 g 咪唑-2-甲醛（2-ICA）于20 mL DMF溶液中，超声10–20分钟至完全溶液，搅拌状态下加入5 mL合成的混有Al3+的铜纳米团簇溶液，并搅拌12 h，将搅拌12 h后的混合溶液静置30-60分钟，将上清液移除，剩下的以8000–10000转/min离心5–10分钟，接着用5-10 mL mL DMF溶液洗涤3次，洗涤后再以8000–10000转/min离心5–10分钟，最终得到的沉淀置于真空干燥箱中并在45–60 ℃的温度下烘干，即得金属有机框架/铜纳米团簇；所述合成的混有Al3+的铜纳米团簇溶液的制备方法为：在合成的pH=7–7.4的CuNCs溶液中加入50–100 μL的Al3+水溶液（0.1 M）,搅拌5–10分钟，混合液由澄清透明状态变至白色浑浊状态，即得；合成铜纳米团簇（CuNCs）的方法：将2.5–5 mL的50 mM谷胱甘肽水溶液与2.5–5 mL 的10 mM CuSO4·5H2O水溶液充分混合，然后在搅拌状态下用1 M NaOH溶液调节混合液pH值至7–7.4，混合液由白色悬浊状态变至澄清透明状态，即得。 4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述线性关系式的获得方法为：分别取1 mL的0-10 mM不同浓度的ATP水溶液分别加入盛有1 mL的CuNCs/ZIF-90水溶液的离心管中,混合均匀后加入1 mL Tris-HCl缓冲液，37 ℃的条件下孵化10分钟，以365 nm为激发波长测定发射强度，并将得到的实验数据整理作图获得线性方程，线性关系为F0-F/F0=0.0004c+0.1042； F0为不加ATP的荧光强度； F为加入不同浓度ATP后的荧光强度；线性相关系数R2=0.9950。 5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述0–10 mM不同浓度ATP水溶液浓度分别为0、0.001、0.005、0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.3、0.5、0.7、1、2、3、4、5、10 mM。 6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述Tris-HCl缓冲液浓度为100 mM，pH=7.4。
所属类别：	发明专利