详情

原文传递一种异鲁米诺功能化MOFs检测β-淀粉样蛋白的电化学发光免疫传感器的制备方法

专利名称：	一种异鲁米诺功能化MOFs检测β-淀粉样蛋白的电化学发光免疫传感器的制备方法
摘要：	本发明涉及一种异鲁米诺功能化MOFs检测β‑淀粉样蛋白的电化学发光免疫传感器的制备方法，属于电化学发光传感器领域。本发明合成了发光试剂功能化的MOFs作为信号标记物，并以异鲁米诺作为发光试剂，以过氧化氢作为共反应剂，以钴基MOFs作为共反应促进剂，利用钴基MOFs对过氧化氢良好的催化性能，实现了发光试剂ECL信号的放大，同时MOFs大的比表面积增加了异鲁米诺的负载量，提高了发光试剂的发光效率和稳定性。本发明对β‑淀粉样蛋白检测的线性范围为10 fg·mL‑1‑100 ng·mL‑1，检测限为3 fg·mL‑1。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山东;37
申请人：	济南大学
发明人：	魏琴;王超;魏东;范大伟;任祥;王耀光;吴丹;马洪敏;鞠熀先
专利状态：	有效
申请日期：	2018-12-28T00:00:00+0800
发布日期：	2019-04-23T00:00:00+0800
申请号：	CN201811618771.1
公开号：	CN109668874A
代理机构：	济南誉丰专利代理事务所(普通合伙企业)
代理人：	高强
分类号：	G01N21/76(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	250022 山东省济南市市中区南辛庄西路336号
主权项：	1.一种异鲁米诺功能化MOFs检测β-淀粉样蛋白的电化学发光免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）将直径为4 mm的玻碳电极用氧化铝粉打磨抛光至镜面，再用超纯水洗涤干净；（2）将6 µL、浓度为4～10 mg/mL金功能化四氧化三铁-聚吡咯复合物的水溶液滴涂到电极表面，室温保存至干燥；（3）继续滴涂6 μL、浓度为1 μg/mL的β-淀粉样蛋白捕获抗体标准溶液于玻碳电极表面，4 ºC冰箱中保存至干燥，超纯水清洗；（4）继续滴涂3 μL、质量分数为1%的牛血清白蛋白，封闭非特异性活性位点，4 ºC冰箱中保存至干燥，超纯水清洗；（5）继续将6 μL、浓度为10 fg/mL～100 ng/mL的一系列不同浓度的β-淀粉样蛋白标准溶液滴涂在电极表面，4 ºC冰箱中保存至干燥，超纯水清洗；（6）将6 μL所制得的异鲁米诺功能化钴基MOFs与金纳米粒子以及检测抗体的复合物滴涂到电极表面，4 ºC冰箱中保存至干燥，超纯水清洗，即制得检测β-淀粉样蛋白的电化学发光免疫传感器。 2.如权利要求1所述的一种异鲁米诺功能化MOFs检测β-淀粉样蛋白的电化学发光免疫传感器的制备方法，所述异鲁米诺功能化钴基MOFs与金纳米粒子以及检测抗体的复合物，其特征在于，制备步骤如下：（1）制备异鲁米诺功能化钴基MOFs 将0.1～0.5 mmol异鲁米诺与0.3～0.7 mmol 2-氨基对苯二甲酸加入到15 mL N，N-二甲基甲酰胺中，搅拌均匀后滴加1 mL、质量分数为1%的戊二醛，避光条件下磁力搅拌48小时，然后加入0.3～0.8 mmol硝酸钴，100～140 ºC油浴搅拌下反应2～8小时，离心后获得沉淀，用乙醇、超纯水各洗涤三次后置于真空干燥箱，60 ºC干燥后得到异鲁米诺功能化钴基MOFs；（2）制备异鲁米诺功能化钴基MOFs与金纳米粒子的复合物将0.5 mL邻苯二甲酸二乙二醇二丙烯酸酯加入到3 mL超纯水中，超声5分钟使其分散均匀，然后加入5 mg所制备的异鲁米诺功能化钴基MOFs，振荡12小时后离心并与10 mL带负电的金纳米粒子溶液混合，再振荡12小时后得到异鲁米诺功能化钴基MOFs与金纳米粒子的复合物；（3）制备异鲁米诺功能化钴基MOFs与金纳米粒子以及检测抗体的复合物将离心后的异鲁米诺功能化钴基MOFs与金纳米粒子的复合物分散到1 mL、pH为7.4的磷酸盐缓冲溶液中，加入1 mL、1 μg·mL-1的β-淀粉样蛋白检测抗体，4 ºC下振荡孵化12小时，离心后分散到1 mL、pH为7.4的磷酸盐缓冲溶液中，加入10 μL、质量分数为1%的牛血清白蛋白封闭非特异性活性位点。 3.如权利要求1所述的一种异鲁米诺功能化MOFs检测β-淀粉样蛋白的电化学发光免疫传感器的制备方法，所述金功能化四氧化三铁-聚吡咯复合物，其特征在于，制备步骤如下：（1）制备四氧化三铁纳米颗粒将3～7 mmol三氯化铁分散到40 mL乙二醇中，然后加入44 mmol醋酸钠和1 g聚乙二醇，搅拌30分钟后转移至反应釜中，180～200 ºC反应5～10小时后，通过磁性分离得到四氧化三铁纳米颗粒；（2）制备金功能化四氧化三铁-聚吡咯复合物将50 mL超纯水通氮气20分钟后加入0.066 g十二烷基苯磺酸钠和0.025 g四氧化三铁纳米颗粒，搅拌15分钟；随后，加入吡咯搅拌1小时；最后，逐滴加入5.0 mL、0.1～0.4 mol·L-1的三氯化铁溶液，室温下搅拌12～24小时后磁性分离得到四氧化三铁-聚吡咯复合物；称取10 mg四氧化三铁-聚吡咯复合物分散到1 mL超纯水中，再与40 mL金纳米粒子溶液混合，振荡5小时后通过磁性分离得到金功能化四氧化三铁-聚吡咯复合物，用乙醇、超纯水各洗涤三次后置于真空干燥箱，60 ºC干燥。 4.如权利要求2和权利要求3所述的金纳米粒子溶液，是将1 mL、质量分数为1%的氯金酸溶液稀释到100 mL超纯水中，加入2.5 mL、质量分数为1%的柠檬酸三钠搅拌至沸腾后制得的。 5.如权利要求1所述的10 fg/mL～100 ng/mL的一系列不同浓度的β-淀粉样蛋白标准溶液为从上海领潮生物科技有限公司购得的1 mg/mL的β-淀粉样蛋白溶液用磷酸盐缓冲溶液稀释得到。 6.如权利要求1所述的β-淀粉样蛋白的检测，其特征在于，检测步骤如下：（1）将Ag/AgCl电极作为参比电极、铂丝电极作为对电极、所制得的电化学发光传感器作为工作电极，连接在化学发光检测仪的暗盒中，将电化学工作站和化学发光检测仪连接在一起；（2）化学发光检测仪参数设置为，光电倍增管的高压设置为700 V，扫描速率设置为0.1V/s；（3）电化学工作站参数设置为，循环伏安扫描电位范围为0 V～0.7 V，扫描速率设置为0.1 V/s；（4）使用含7～12 μL过氧化氢的10 mL磷酸盐缓冲溶液，通过电化学发光法检测不同浓度的β-淀粉样蛋白产生的电化学发光信号强度；所述磷酸盐缓冲溶液，其pH为7.4，用0.1mol·L-1磷酸氢二钠和0.1 mol·L-1磷酸二氢钾配制；（5）根据所得的电化学发光强度值与β-淀粉样蛋白浓度对数的线性关系，绘制工作曲线。
所属类别：	发明专利