详情

原文传递一种奥马珠单抗的电荷异质体的分离方法

专利名称：	一种奥马珠单抗的电荷异质体的分离方法
摘要：	本发明提供了一种奥马珠单抗的电荷异质体的分离方法。所述分离方法包括如下步骤：用羧肽酶对奥马珠单抗样品进行酶切；用离子交换高效液相色谱对奥马珠单抗样品，或者羧肽酶酶切后的奥马珠单抗样品进行分离。本发明提供的分离方法检测时间适宜，40min即可完成检测，酸峰、主峰和碱峰的出峰时间适宜，各峰的分离度高，该分离方法具有较高的专属性、准确度及精密度，稳定可行。
专利类型：	发明专利
申请人：	上海博威生物医药有限公司
发明人：	王少雄;吕品;陈鹏
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T17:00:00+0805
申请号：	CN201911417917.0
公开号：	CN111024883A
代理机构：	北京品源专利代理有限公司
代理人：	巩克栋
分类号：	G01N30/96;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/74;G01N30/86;G01N30/88;C07K16/42;C07K1/18;B01D15/08;G;C;B;G01;C07;B01;G01N;C07K;B01D;G01N30;C07K16;C07K1;B01D15;G01N30/96;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/74;G01N30/86;G01N30/88;C07K16/42;C07K1/18;B01D15/08
申请人地址：	201318 上海市浦东新区周浦镇蓝靛路1199号2幢301室
主权项：	1.一种奥马珠单抗的电荷异质体的分离方法，其特征在于，所述分离方法包括如下步骤： (1)用羧肽酶对奥马珠单抗样品进行酶切； (2)用离子交换高效液相色谱对奥马珠单抗样品，或者羧肽酶酶切后的奥马珠单抗样品进行分离。 2.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于，步骤(1)中所述羧肽酶与所述奥马珠单抗样品的质量比为(1-5):100，进一步优选为1:100。 3.根据权利要求1或2所述的分离方法，其特征在于，步骤(1)中所述酶切的反应温度为35-40℃，进一步优选为37℃；优选地，步骤(1)中所述酶解的反应时间为3-6.5h，进一步优选为3h。 4.根据权利要求1-3任一项所述的分离方法，其特征在于，所述离子交换高效液相色谱的进样浓度为0.5-1.5mg/mL，进一步优选为1mg/mL。 5.根据权利要求1-4任一项所述的分离方法，其特征在于，所述离子交换高效液相色谱采用的色谱柱的固定相为带羧基官能团的弱阳离子键合相；优选地，所述离子交换高效液相色谱采用的色谱柱的温度为30-40℃，进一步优选为32℃。 6.根据权利要求1-5任一项所述的分离方法，其特征在于，所述离子交换高效液相色谱的检测波长为275-285nm，进一步优选为280nm。 7.根据权利要求1-6任一项所述的分离方法，其特征在于，所述离子交换高效液相色谱采用的流动相中含有哌嗪、咪唑和Tris；优选地，所述流动相的流速为0.8-1.2mL/min，进一步优选为1mL/min。 8.根据权利要求1-7任一项所述的分离方法，其特征在于，所述离子交换高效液相色谱采用流动相进行梯度洗脱；优选地，所述梯度洗脱使用的流动相的pH随洗脱时间先增大后减小。 9.根据权利要求8所述的分离方法，其特征在于，所述梯度洗脱使用的流动相由如下体积百分比的流动相A和流动相B组成：0-30min：75-85％流动相A和15-25％流动相B；30-36min：100％流动相B；36-40min：75-85％流动相A和15-25％流动相B；所述流动相A的包括11.6mM哌嗪、15mM咪唑和2.4mM Tris，pH为5.0-6.0；所述流动相B包括11.6mM哌嗪、15mM咪唑和2.4mM Tris，pH为9.2-9.8；优选地，所述梯度洗脱使用的流动相由如下体积百分比的流动相A和流动相B组成：0-30min：80％流动相A和20％流动相B；30-36min：100％流动相B；36-40min：80％流动相A和20％流动相B；所述流动相A的包括11.6mM哌嗪、15mM咪唑和2.4mM Tris，pH为6.0；所述流动相B包括11.6mM哌嗪、15mM咪唑和2.4mM Tris，pH为9.5。 10.根据权利要求1-9任一项所述的分离方法，其特征在于，所述离子交换高效液相色谱的进样体积为15-25μL，进一步优选为20μL。
所属类别：	发明专利