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原文传递一种奥马珠单抗疏水性的检测方法

专利名称：	一种奥马珠单抗疏水性的检测方法
摘要：	本发明提供了一种奥马珠单抗疏水性的检测方法。所述检测方法包括如下步骤：用木瓜蛋白酶将奥马珠单抗酶解为Fab片段和Fc片段；用疏水色谱串联高效液相色谱对所述Fab片段和Fc片段进行分离，根据所述Fab片段的谱图分析得到奥马珠单抗的疏水性。本发明提供的检测方法检测时间适宜，35‑37min即可完成检测，Fab片段和Fc片段的出峰时间适宜，各峰的分离度高，该检测方法具有较高的专属性、准确度及精密度，方法稳定可行。
专利类型：	发明专利
申请人：	上海博威生物医药有限公司
发明人：	王少雄;吕品;陈鹏
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T17:00:00+0805
申请号：	CN201911423842.7
公开号：	CN111024862A
代理机构：	北京品源专利代理有限公司
代理人：	巩克栋
分类号：	G01N30/02;G01N30/06;G01N30/74;G01N30/86;G01N30/34;G01N30/88;G;G01;G01N;G01N30;G01N30/02;G01N30/06;G01N30/74;G01N30/86;G01N30/34;G01N30/88
申请人地址：	201318 上海市浦东新区周浦镇蓝靛路1199号2幢301室
主权项：	1.一种奥马珠单抗疏水性的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括如下步骤： (1)用木瓜蛋白酶将奥马珠单抗酶解为Fab片段和Fc片段； (2)用疏水色谱串联高效液相色谱对所述Fab片段和Fc片段进行分离，根据所述Fab片段的谱图分析得到Fab片段的疏水性分布，进而得到奥马珠单抗的疏水性。 2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)中所述木瓜蛋白酶与所述奥马珠单抗的质量比为(0.5-2):100，进一步优选为1:100；优选地，步骤(1)中所述酶解是在溶液中进行，所述溶液中奥马珠单抗的浓度为2-5mg/mL，进一步优选为2mg/mL。 3.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)中所述酶解的反应温度为35-40℃，进一步优选为37℃；优选地，步骤(1)中所述酶解的反应时间为1-4h，进一步优选为2h。 4.根据权利要求1-3任一项所述的检测方法，其特征在于，所述疏水色谱串联高效液相色谱采用的色谱柱的固定相为苯基键合相；优选地，所述疏水色谱串联高效液相色谱采用的色谱柱的温度为35-40℃，进一步优选为40℃。 5.根据权利要求1-4任一项所述的检测方法，其特征在于，所述疏水色谱串联高效液相色谱的检测波长为210-220nm，进一步优选为214nm。 6.根据权利要求1-5任一项所述的检测方法，其特征在于，所述疏水色谱串联高效液相色谱采用的流动相中含有Tris和硫酸铵；优选地，所述流动相的流速为0.8-1.2mL/min，进一步优选为1mL/min。 7.根据权利要求1-6任一项所述的检测方法，其特征在于，所述疏水色谱串联高效液相色谱采用流动相进行梯度洗脱；优选地，所述梯度洗脱使用的流动相的浓度随洗脱时间先减小后增大。 8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱使用的流动相由如下体积百分比的流动相A和流动相B组成：0-3min：72-78％流动相A和22-28％流动相B；3-(20.5±2.5)min：50-60％流动相A和40-50％流动相B；(20.5±2.5)-(26±1)min：15-20％流动相A和80-85％流动相B；(26±1)-(28.5±1)min：100％流动相B；(28.5±1)-(36±1)min：72-78％流动相A和22-28％流动相B；所述流动相A的包括20mM Tris和2M硫酸铵，pH为7.5；所述流动相B包括20mM Tris，pH为7.5；优选地，所述梯度洗脱使用的流动相由如下体积百分比的流动相A和流动相B组成：0-3min：75％流动相A和25％流动相B；3-23min：57％流动相A和43％流动相B；23-27min：17％流动相A和83％流动相B；27-29.5min：100％流动相B；29.5-37min：75％流动相A和25％流动相B；所述流动相A的包括20mM Tris和2M硫酸铵，pH为7.5；所述流动相B包括20mM Tris，pH为7.5。 9.根据权利要求1-8任一项所述的检测方法，其特征在于，所述疏水色谱串联高效液相色谱的试样的制备方法为：用所述疏水色谱串联高效液相色谱的起始流动相对步骤(1)得到的反应液进行稀释，得到试样；优选地，所述试样中奥马珠单抗的酶解产物的浓度为0.5-1.5mg/mL，进一步优选为1mg/mL；优选地，所述试样的温度为4-10℃，进一步优选为10℃。 10.根据权利要求1-9任一项所述的检测方法，其特征在于，所述疏水色谱串联高效液相色谱的进样体积为5-15μL，进一步优选为5μL。
所属类别：	发明专利