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原文传递生物分子完全免固定的纸基电化学传感器的构建

专利名称：	生物分子完全免固定的纸基电化学传感器的构建
摘要：	本发明公开了一种完全免固定高效检测miRNA的分析策略。本方法首先在微流控纸芯片原位生长金纳米，随后通过羰基和金的相互作用将葫芦[7]脲固定在纸工作电极上。由于带负电荷的磷酸二酯主链与葫芦[7]脲的负羰基之间的排斥作用，亚甲基蓝标记的探针几乎不能与葫芦[7]脲形成配合物，因此不能有效地产生电化学响应。当目标物和外切酶加入到溶液后，亚甲基蓝标记的探针被外切酶剪切释放亚甲基蓝标记的单核苷酸。由于葫芦[7]脲的超分子识别能力和单核苷酸具有超低的负电荷，亚甲基蓝标记的单核苷酸被葫芦[7]脲捕获产生可检测的电信号实现对目标物的量化检测。本方法不具有复杂的材料生长和生物标记过程，省时省力，操作简单，检测快速，为其他疾病相关生物标记物的小型化检测提供一个途径。
专利类型：	发明专利
申请人：	济南大学
发明人：	于京华;史慧慧;王衍虎
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T09:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T17:00:00+0805
申请号：	CN202010021198.7
公开号：	CN111024793A
代理机构：	济南誉丰专利代理事务所(普通合伙企业)
代理人：	赵凤
分类号：	G01N27/327;G01N27/30;G01N27/48;C12Q1/6825;G;C;G01;C12;G01N;C12Q;G01N27;C12Q1;G01N27/327;G01N27/30;G01N27/48;C12Q1/6825
申请人地址：	250022 山东省济南市市中区济南大学
主权项：	1.生物分子完全免固定的纸基电化学传感器的构建，其特征在于该方法包括以下步骤：（1）在计算机上用Adobe illustrator CS4设计纸芯片的图案，将设计好的打印图案通过蜡打印机打印在A4色谱纸上，然后将打印过的色谱纸放在烘箱中，在100 ℃加热60 s形成疏水区域和亲水的工作区域；（2）用丝网印刷技术在步骤（1）中获得的纸芯片上印刷三电极体系（碳工作电极、碳对电极和Ag/AgCl参比电极）；（3）利用原位还原法在碳电极的工作区域生长金纳米，其具体步骤为：首先，20 μL金纳米粒子溶液滴涂在电极表面，在室温下干燥，此过程重复三次，随后称取0.013 g盐酸羟胺溶解于1 mL去离子水中，加入1 mL质量分数1 %的氯金酸，充分摇晃后，量取20 μL滴在电极表面，室温下干燥即可，最后，将电极在1 mM葫芦[7]脲中培育1 h; （4）取30 μL 10 μM亚甲基蓝标记的DNA 和20 μL 不同浓度的miRNA溶解在37 μLTris-HCl 缓冲液中，在37℃下培育2 h，然后将3 µL T7 核酸外切酶 (2 U/µL) 和 10 µL1× NEB 缓冲液加入到上述溶液中，在37 ℃下培育1 h; （5）将步骤（4）中获得的溶液添加到磷酸盐缓冲溶液中，然后将上述溶液滴加到步骤（3）的电极的工作区域，利用三电极系统通过微分脉冲伏安法进行电化学信号检测。 2.根据权利要求1所述的生物分子完全免固定的纸基电化学传感器的构建，其特征是金种子溶液合成过程是：取90 mL二次水置于三口烧瓶中并加热到90 ℃，然后加入0.5 -0.8 mL质量分数为1 %的氯金酸溶液，持续加热至96 ℃，反应1 min后，加入2.5 mL质量分数为1 %的柠檬酸钠，在搅拌下反应15 min，得到金纳米粒子溶液。 3.根据权利要求1所述的生物分子完全免固定的纸基电化学传感器的构建，其特征是1×NEB 缓冲液配制过程是取20 mM Tris-HAc缓冲液，依次加入0.2145g四水乙酸镁、0.49 g醋酸钾、0.0154 g的二硫苏糖醇，随后用醋酸调节溶液pH到7.9，定容到100 mL。
所属类别：	发明专利