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原文传递基于CoOOH-TMB氧化系统的比色方法用于检测谷胱甘肽

专利名称：	基于CoOOH-TMB氧化系统的比色方法用于检测谷胱甘肽
摘要：	本公开涉及一种基于CoOOH‑TMB氧化系统的比色方法检测谷胱甘肽的方法及其试剂盒，检测GSH的方法包括以下步骤：将待测样品与羟基氧化钴纳米片溶液混合后进行孵育，获得混合溶液一；向混合溶液一中加入醋酸‑醋酸盐缓冲溶液和四甲基联苯胺溶液，混合均匀，获得混合溶液二；测定混合溶液二的吸光度，即可测定GSH的含量。该方法和试剂盒灵敏度高、特异性好，操作简单方便，成本低廉。
专利类型：	发明专利
申请人：	济南大学
发明人：	袁玲玲;郭文娟
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T13:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T17:00:00+0805
申请号：	CN202010030810.7
公开号：	CN111024636A
代理机构：	济南誉丰专利代理事务所(普通合伙企业)
代理人：	赵凤
分类号：	G01N21/31;G01N1/38;G;G01;G01N;G01N21;G01N1;G01N21/31;G01N1/38
申请人地址：	250022 山东省济南市市中区南辛庄西路336号济南大学
主权项：	1.一种检测GSH的试剂盒，其特征是，该试剂盒包括：羟基氧化钴纳米片溶液或配置羟基氧化钴纳米片溶液的物质；醋酸-醋酸盐缓冲溶液或配制醋酸-醋酸盐缓冲溶液的缓冲物质；和，四甲基联苯胺。 2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征是，所述醋酸-醋酸盐可为醋酸-醋酸钠，pH为3～4，进一步的，pH为4；进一步的，所述检测GSH的试剂盒还包括说明书。 3.一种检测GSSG试剂盒，其特征是，该试剂盒包括： GSH掩蔽剂； GSSG碱性还原剂；所述GSSG碱性还原剂的中和试剂；羟基氧化钴纳米片溶液或配置羟基氧化钴纳米片溶液的物质；醋酸-醋酸盐缓冲溶液或配制醋酸-醋酸盐缓冲溶液的缓冲物质；和，四甲基联苯胺。 4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征是，所述GSH掩蔽剂为N-乙基马来酰亚胺；进一步的，所述GSSG碱性还原剂为硼氢化钠；进一步的，GSSG碱性还原剂的中和试剂为有机酸；进一步的，所述醋酸-醋酸盐可为醋酸-醋酸钠(HAc-NaAc)，pH为3～4；进一步的，所述检测GSSG的试剂盒还包括说明书。 5.一种检测GSH的方法，该方法包括以下步骤：将待测样品与羟基氧化钴纳米片溶液混合后进行孵育，获得混合溶液一；向混合溶液一中加入醋酸-醋酸盐缓冲溶液和四甲基联苯胺溶液，混合均匀，获得混合溶液二；测定混合溶液二的吸光度，即可测定GSH的含量。 6.如权利要求5所述的方法，其特征是，所述待测样品可以是生物样品或非生物样品；进一步的，所述样品是细胞、全血、血浆或血清；进一步的，所述羟基氧化钴纳米片溶液为羟基氧化钴纳米片和水或聚乙二醇组成的混合溶液；进一步的，所述羟基氧化钴纳米片溶液为羟基氧化钴纳米片和聚乙二醇组成的混合溶液；进一步的，所述羟基氧化钴纳米片的形貌为规则的或不规则的六边形，六边形的边长为50～150nm；更进一步的，羟基氧化钴纳米片的制备方法，该方法包括以下步骤：向Co(NO3)2·6H2O溶液中加入NaOH溶液，将混合物超声分散，然后将NaClO溶液加入到上述超声处理过的混合物中再进行超声处理，获得羟基氧化钴纳米片；其中，所述Co(NO3)2·6H2O溶液的浓度为5～15mmoL/L，NaOH溶液的浓度为0.5～1.5moL/L，NaClO溶液的浓度为0.5～1.5moL/L，加入的Co(NO3)2·6H2O溶液、NaOH溶液和NaClO溶液的体积比例为400～800:100～150:10～50。 7.如权利要求5所述的方法，其特征是，所述孵育温度为25～42℃，孵育时间为3～5h；进一步的，所述孵育温度为40℃，时间为4h；进一步的，所述羟基氧化钴纳米片溶液的浓度为50～150μg/mL，所述TMB溶液的浓度为2～8mmoL/L；进一步的，待测样品、羟基氧化钴纳米片溶液和TMB溶液的体积比例为(300～500)：(300～500)：(50～150)；进一步的，所述检测GSH的方法，还包括制备标准曲线以及线性方程的步骤。 8.一种检测GSSG的方法，其特征是，该方法包括以下步骤：向待测样品中加入GSH掩蔽剂，混合均匀，得到混合溶液三；向混合溶液三中加入GSSG碱性还原剂，混合均匀，得到混合溶液四；向混合溶液四中加入所述GSSG碱性还原剂的中和试剂，混合均匀，得到混合溶液五；按照权利要求5～7中任一项所述的检测GSH的方法进行操作，即可检测GSSG的含量。 9.如权利要求8所述的方法，其特征是：所述检测GSSA的方法，还包括制备标准曲线以及线性方程的步骤。 10.一种测定GSH和GSSG比值的方法，其特征是，该方法包括以下步骤：根据权利要求5～7中任一项所述的检测GSH的方法测定待测样品中的GSH的含量；根据权利要求8或9所述的检测GSSG的方法测定待测样品中的GSSG的含量；计算GSH和GSSH的比值。
所属类别：	发明专利