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原文传递一种先兆子痫风险预测标志物PIGF的Simoa试剂盒及其应用

专利名称：	一种先兆子痫风险预测标志物PIGF的Simoa试剂盒及其应用
摘要：	本发明属于免疫检测技术、先兆子痫风险预测领域，特别是指一种标志物PIGF的Simoa试剂盒及其应用。所述Simoa试剂盒包括捕获抗体包被的磁珠、PIGF标准品、生物素化的检测抗体、SBG溶液、荧光底物溶液和样本稀释液。本发明提供的基于Simoa平台和双抗夹心法检测人血液中PIGF蛋白含量的Simoa试剂盒，不仅可以定性还可以定量的检测人血液中PIGF含量；具有高灵敏度、高通量、较少样本量、自动化、花费时间短、操作简便、检测范围宽等特点。
专利类型：	发明专利
申请人：	郑州大学
发明人：	李朝辉;蔡齐勇;张琳;屈凌波
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T16:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T14:00:00+0805
申请号：	CN202010047705.4
公开号：	CN111007265A
代理机构：	郑州优盾知识产权代理有限公司
代理人：	冉珊敏
分类号：	G01N33/68;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/68
申请人地址：	450001 河南省郑州市高新区科学大道100号
主权项：	1.一种先兆子痫标志物PIGF的Simoa试剂盒，其特征在于：所述Simoa试剂盒包括捕获抗体包被的磁珠、PIGF标准品、生物素化的检测抗体、SBG溶液、荧光底物溶液和样本稀释液。 2.根据权利要求1所述的先兆子痫标志物PIGF的Simoa试剂盒，其特征在于，所述捕获抗体包被的磁珠的制备方法为：（1）将捕获抗体通过超滤管进行换液处理；（2）将2.7μm磁珠用EDC进行活化；（3）于4℃条件下，将步骤（1）处理的捕获抗体与步骤（2）活化的磁珠混合孵育2-3h；（4）经步骤（3）孵育的产物用PBST溶液洗两次后，用封闭液于37℃封闭，最后用磁珠稀释液洗两次，即获得捕获抗体包被的磁珠，于磁珠稀释液中储存。 3.根据权利要求2所述的先兆子痫标志物PIGF的Simoa试剂盒，其特征在于：所述步骤（1）中捕获抗体为鼠抗人PIGF单克隆抗体；超滤管使用的缓冲液是为50mmol/L吗啉乙磺酸缓冲液，pH=6.2。 4.根据权利要求2所述的先兆子痫标志物PIGF的Simoa试剂盒，其特征在于：所述步骤（3）中捕获抗体的反应浓度为0.1-0.2mg/mL；活化的磁珠的反应浓度为1.2×109/mL。 5.根据权利要求2所述的先兆子痫标志物PIGF的Simoa试剂盒，其特征在于：所述步骤（4）中PBST溶液为10mmol/LPBS+1%Tween20，pH=7.4；封闭液为10mmol/LPBS+1%BSA，pH=7.4；磁珠稀释液为50mmol/LTris-HCl+10mmol/LEDTA+0.1%Tween20+1%BSA，pH=7.4。 6.根据权利要求1所述的先兆子痫标志物PIGF的Simoa试剂盒，其特征在于，所述生物素化的检测抗体的制备方法为：将检测抗体用PBS溶液通过超滤管进行换液处理，于室温下加入NHS-Biotin或其衍生物，反应30min，得生物素化后的检测抗体，用超滤管进行纯化，即获得生物素化的检测抗体，其中检测抗体为兔抗人PIGF多克隆抗体。 7.根据权利要求6所述的先兆子痫标志物PIGF的Simoa试剂盒，其特征在于：所述检测抗体与NHS-Biotin或其衍生物的反应物质的量比为1:40；PBS溶液为10mmol/L磷酸盐缓冲液，pH=7.4。 8.根据权利要求1所述的先兆子痫标志物PIGF的Simoa试剂盒，其特征在于：所述SBG溶液从原始浓度通过酶稀释液稀释到浓度为150pmol/L，其中酶稀释液为10mmol/LPBS+0.5%胎牛血清+1mmol/LMgCl2，pH=7.4；所述PIGF标准品通过样本稀释液被配制成1mL，其余标准品可以根据需要自行稀释配制；其中样本稀释液为10mmol/LPBS+5mmol/LEDTA+0.1%Tween20+2%BSA；荧光底物为试卤灵-β-半乳糖苷，荧光底物溶液的浓度为100μmol/L。 9.权利要求1-8任一项所述先兆子痫标志物PIGF的Simoa试剂盒在制备先兆子痫风险预测诊断试剂中的应用。 10.权利要求1-8任一项所述先兆子痫标志物PIGF的Simoa试剂盒在检测人血液中PIGF含量中的应用。
所属类别：	发明专利