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原文传递用于检测银离子浓度的荧光适体传感器及其制备方法和应用

专利名称：	用于检测银离子浓度的荧光适体传感器及其制备方法和应用
摘要：	本发明属于荧光适体传感器领域，特别是指用于检测银离子浓度的荧光适体传感器及其制备方法和应用。本申请基于核酸适体功能化的纳米金和荧光检测技术灵敏度高的优点，将40nm的金作为淬灭基团与探针Ⅰ的5端通过Au‑S连接起来，FAM做为荧光基团标记在探针Ⅱ的3端，构建了一种用于检测银离子浓度的荧光适体传感器，并对水环境中不同浓度的银离子进行检测，从而验证该传感器的检测性能。实验结果表明，该传感器检测的线性范围在10‑60nmol/L，检出限为10nmol/L。
专利类型：	发明专利
申请人：	郑州轻工业大学
发明人：	任林娇;姜利英;秦自瑞;张培;王慰;张吉涛;王延峰;姜素霞
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T17:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T14:00:00+0805
申请号：	CN202010053684.7
公开号：	CN111007053A
代理机构：	郑州优盾知识产权代理有限公司
代理人：	冉珊敏
分类号：	G01N21/64;G;G01;G01N;G01N21;G01N21/64
申请人地址：	450002 河南省郑州市金水区东风路5号
主权项：	1.用于检测银离子浓度的荧光适体传感器的制备方法，其特征在于步骤如下：（1）将探针Ⅰ和探针Ⅱ分别加入TCEP溶液中活化2h，得核酸适体溶液和HDNA-FAM溶液；（2）将纳米金溶液与步骤（1）的核酸适体溶液混合并振荡培养12h，得混合液；（3）向步骤（2）的混合液中加入NaCl溶液，振荡培养24h后，离心、去除上清液并将沉淀分散于Tris-CH3COOH缓冲液中，最后加入步骤（1）的HDNA-FAM溶液，即得荧光适体传感器溶液。 2.根据权利要求1所述的用于检测银离子浓度的荧光适体传感器的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）中探针Ⅰ的DNA序列为5’-SH-CTACCCTAGC-3’；探针Ⅱ的DNA序列为5’-GCTACCCTAG-FAM-3’。 3.根据权利要求2所述的用于检测银离子浓度的荧光适体传感器的制备方法，其特征在于：所述核酸适体溶液中探针Ⅰ的终浓度为5μM、HDNA-FAM溶液中探针Ⅱ的终浓度为5μM。 4.根据权利要求3所述的用于检测银离子浓度的荧光适体传感器的制备方法，其特征在于：所述TCEP溶液的浓度为100mM，TCEP溶液中含有20mMTris-CH3COOH。 5.根据权利要求1所述的用于检测银离子浓度的荧光适体传感器的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中纳米金溶液的浓度为12.5μg/mL，纳米金溶液与步骤（1）的核酸适体溶液的体积比为（1-8）：1。 6.根据权利要求1所述的用于检测银离子浓度的荧光适体传感器的制备方法，其特征在于：所述步骤（3）中NaCl溶液的浓度为2mol/L，Tris-CH3COOH缓冲液的浓度为10mmol/L、pH为7，Tris-CH3COOH缓冲液的体积不小于600μL。 7.根据权利要求6所述的用于检测银离子浓度的荧光适体传感器的制备方法，其特征在于：加入NaCl溶液的具体操作为：每隔3h加一次，最终使NaCl的浓度达到0.1-0.4 mol/L；离心的条件为14000rpm离心20min。 8.根据权利要求7所述的用于检测银离子浓度的荧光适体传感器的制备方法，其特征在于：所述荧光适体传感器溶液中探针Ⅰ和探针II的物质的量比为1：1。 9.权利要求1-8任一项方法所制备的荧光适体传感器，其特征在于：所述荧光适体传感器基于荧光共振能量转移原理，将DNA功能化的纳米金作为能量受体，修饰在核酸适体上的FAM作为能量供体。 10.权利要求9所述的荧光适体传感器在灵敏、特异性的检测水环境中的银离子浓度的应用，其特征在于，检测步骤为：向荧光适体传感器溶液中加入100μL待测样本，于30℃孵化40min，取出600μL放入荧光光谱仪，检测荧光强度值，代入线性回归方程y=-0.87419x+235.5907， R2=0.994997，即可得出待测样本中银离子浓度。
所属类别：	发明专利