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原文传递一种结合双向凝胶电泳和质谱鉴定糖蛋白糖链结构的方法

专利名称：	一种结合双向凝胶电泳和质谱鉴定糖蛋白糖链结构的方法
摘要：	本发明公开了一种结合双向凝胶电泳和质谱鉴定糖蛋白糖链结构的方法。所述方法包括以下步骤：S1、对生物样本中的糖蛋白进行特异性富集并通过双向凝胶电泳进行分离，根据目标糖蛋白的分子量和等电点选定目标糖蛋白异构体凝胶斑点；S2、使用双向凝胶电泳蛋白印迹和质谱对选定的目标糖蛋白异构体凝胶斑点进行确认；S3、对步骤S2中确认了的目标糖蛋白异构体凝胶斑点进行胶内酶解和质谱分析，鉴定其肽段序列和糖链结构。本发明适用于各种蛋白翻译后修饰(糖基化，泛素化和乙酰化等)生物标志物异构体和修饰体的分离以及结构鉴定，可以显著提高翻译后修饰蛋白作为诊断标志物的灵敏度和特异性。
专利类型：	发明专利
申请人：	上海交通大学
发明人：	肖华;刘莎;张岩
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T17:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
申请号：	CN202010055249.8
公开号：	CN111077256A
代理机构：	上海段和段律师事务所
代理人：	陈少凌;郭国中
分类号：	G01N30/08;G01N30/72;G;G01;G01N;G01N30;G01N30/08;G01N30/72
申请人地址：	200240 上海市闵行区东川路800号
主权项：	1.一种结合双向凝胶电泳和质谱鉴定糖蛋白糖链结构的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤： S1、对生物样本中的糖蛋白进行特异性富集并通过双向凝胶电泳进行分离，根据目标糖蛋白的分子量和等电点选定目标糖蛋白异构体凝胶斑点； S2、使用双向凝胶电泳蛋白印迹和质谱对选定的目标糖蛋白异构体凝胶斑点进行确认； S3、对步骤S2中确认了的目标糖蛋白异构体凝胶斑点进行胶内酶解和质谱分析，鉴定其肽段序列和糖链结构。 2.根据权利要求1所述的结合双向凝胶电泳和质谱鉴定糖蛋白糖链结构的方法，其特征在于，步骤S1中，所述生物样本选自动植物组织、细胞、微生物、体液样本。 3.根据权利要求1所述的结合双向凝胶电泳和质谱鉴定糖蛋白糖链结构的方法，其特征在于，步骤S1中，对糖蛋白进行特异性富集包括采用凝集素亲和色谱或亲水性材料方法。 4.根据权利要求1所述的结合双向凝胶电泳和质谱鉴定糖蛋白糖链结构的方法，其特征在于，步骤S2包括用步骤S1中选择的目标糖蛋白的抗体进行双向凝胶电泳蛋白印迹，确定选择的目标糖蛋白异构体凝胶斑点是否为目标糖蛋白。 5.根据权利要求1所述的结合双向凝胶电泳和质谱鉴定糖蛋白糖链结构的方法，其特征在于，步骤S2包括对步骤S1中选择的目标糖蛋白异构体凝胶斑点进行胶内酶解，酶解好的肽段经质谱鉴定其是否为选定的目标糖蛋白。 6.根据权利要求1所述的结合双向凝胶电泳和质谱鉴定糖蛋白糖链结构的方法，其特征在于，步骤S3是对对步骤S2确认的目标糖蛋白异构体凝胶斑点进行胶内酶解，获得的肽段经质谱和生物信息学工具分析鉴定目标糖蛋白的糖链结构。 7.一种如权利要求1所述的方法鉴定的目标糖蛋白的糖链结构在生物标志物检测中的用途。
所属类别：	发明专利