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原文传递中药蜥蜴及其伪品石龙子的鉴别方法

专利名称：	中药蜥蜴及其伪品石龙子的鉴别方法
摘要：	本发明涉及一种中药蜥蜴及其伪品石龙子的鉴别方法，该方法采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳法（Native‑PAGE），结果显示10批蜥蜴样品的3条共有谱带中的1条是区别于石龙子的特征谱带（Rf值为0.37），3批石龙子样品的7条共有谱带中有3条特征谱带（Rf值分别为0.30，0.64，0.77），二者特征谱带位置差别很大，对蛋白谱带进行遗传距离聚类分析，也表明Native‑PAGE法可以将两种药材聚为两类，可作为中药蜥蜴与其伪品石龙子的快速定性鉴别方法，该方法准确性高，重现性好。
专利类型：	发明专利
申请人：	山西医科大学
发明人：	杨官娥;景大山;陈婕;申鸽;杨飞;卢丹丹
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T08:00:00+0805
申请号：	CN202010077321.7
公开号：	CN111122682A
代理机构：	太原倍智知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	张宏
分类号：	G01N27/447;G;G01;G01N;G01N27;G01N27/447
申请人地址：	030001 山西省太原市新建南路56号
主权项：	1.一种中药蜥蜴及其伪品石龙子的鉴别方法，其特征在于，包括步骤：精密称取每批蜥蜴及石龙子干燥药材粉末，分别加入稀释4倍的pH6.7的Tris-HCl缓冲液，置于预冷的研砵中研磨成匀浆状，冰浴超声30 min，0.8×104 r·min-1冷冻离心10 min收集上清液后，再1.2×104 r·min-1冷冻离心10 min，收集上清液，与等体积40%蔗糖溶液混合，作为供试品溶液；采用Native-PAGE电泳方法进行实验，根据获得的结果按公式：相对迁移率（Rf）=蛋白质迁移距离/指示剂迁移距离，计算出各谱带的Rf值，将所有谱带按Rf值由小到大依次编号并以共迁移谱带出现与否作为鉴别依据，分别获得蜥蜴和石龙子的特征谱带，蜥蜴的特征谱带为Rf值0.37；石龙子的特征谱带为Rf值0.30、0.64和0.77；根据蜥蜴和石龙子不同的特征谱带区分蜥蜴及石龙子样品。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：根据电泳谱带的原始二态数据矩阵进行聚类分析，获得Native-PAGE电泳图谱聚类图；根据Native-PAGE电泳图谱聚类图得到的不同分类结果区分蜥蜴及石龙子样品。 3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：在Native-PAGE电泳实验中，分离胶体积分数7%，浓缩胶体积分数3%，胶厚1.5 mm，每条泳道上样30 μL，电极缓冲液为Tris-甘氨酸缓冲液（不含SDS），在负极槽电泳缓冲液中滴加一滴溴酚蓝指示剂；电泳开始时稳流15mA，待溴酚蓝指示剂到达两胶交界处后，稳流20 mA；待指示剂行至胶板下沿1 cm左右停止电泳，整个过程在冰浴中进行，用0.1%考马斯亮蓝R-250进行染色，放入脱色液中脱色直到背景清晰。 4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述的分离胶的配制方法为丙烯酰胺 14g、双丙烯酰胺 0.37 g、用超纯水定容至50 mL，过滤，4℃避光保存；浓缩胶的配制方法为：丙烯酰胺 2.5 g、双丙烯酰胺 0.625 g、用超纯水定容至 25 mL，过滤，4℃避光保存。 5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：染色液的配制方法为考马斯亮蓝（R250）0.2 g、甲醇 40 mL、冰醋酸 14 mL、加纯净水至200 mL。 6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：脱色液的配制方法为：甲醇100 mL、冰醋酸35 mL、加纯净水至500 mL。 7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：Native-PAGE电极缓冲液的配制方法为Tris 0.6 g、甘氨酸 2.88 g、用超纯水定容至1000 mL。 8.根据权利要求1、2、4、5、6或7所述的方法，其特征在于：每批蜥蜴及石龙子干燥药材粉末过40目筛。
所属类别：	发明专利