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原文传递新型冠状病毒IgG抗体酶联免疫检测试剂盒及其检测方法

专利名称：	新型冠状病毒IgG抗体酶联免疫检测试剂盒及其检测方法
摘要：	本发明公开了一种新型冠状病毒IgG抗体酶联免疫检测试剂盒及其制备方法，涉及生物医药领域，包括酶结合物、样品稀释液、阴性对照液、阳性对照液、底物A液、底物B液、浓缩洗涤液、终止液和预包被新冠病毒抗原的包被板，酶结合物为用酶标稀释液按工作浓度配制的羊抗人IgG‑HRP工作液,通过抗原抗体的免疫特异性反应进行检测，以定性判定测试样本中是否存在新型冠状病毒IgG抗体，具有高特异性和抗干扰性强的特点，同时本申请结构简单、检测成本低、准确性好，本发明一种新型冠状病毒IgG抗体酶联免疫检测方法，通过抗原抗体的免疫特异性反应进行检测，具有高特异性、准确性强的特点，步骤简便，设计合理，适合推广。
专利类型：	发明专利
申请人：	中山生物工程有限公司
发明人：	王胜岚;吴德;梁丽君;周惠琼;马玉兰;李梅;黄永宏
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T08:00:00+0805
申请号：	CN202010218561.4
公开号：	CN111122864A
代理机构：	中山市捷凯专利商标代理事务所(特殊普通合伙)
代理人：	杨连华
分类号：	G01N33/569;G01N33/543;G01N33/531;G01N21/31;G;G01;G01N;G01N33;G01N21;G01N33/569;G01N33/543;G01N33/531;G01N21/31
申请人地址：	528400 广东省中山市火炬开发区国家健康基地生物谷大道1号
主权项：	1.一种新型冠状病毒IgG抗体酶联免疫检测试剂盒，其特征在于，包括酶结合物、样品稀释液、阴性对照液、阳性对照液、底物A液、底物B液、终止液、浓缩洗涤液和预包被新冠病毒抗原的包被板；所述酶结合物为用酶标稀释液按工作浓度配制的羊抗人IgG-HRP工作液；所述预包被新冠病毒抗原的包被板的制备方法为：（1）包被：将新冠病毒抗原用包被缓冲液稀释后，按100μL/孔包被到包被板的孔内，在2～8℃吸附21～24小时；（2）封闭：弃去包被液，用10mmol/L的浓缩洗涤液按300μL/孔洗板，再用封闭液按150μL/孔在2～8℃封闭16～18小时；（3）干燥及保存：弃去封闭液，经干燥处理后密封，置2～8℃保存。 2.根据权利要求1所述的新型冠状病毒IgG抗体酶联免疫检测试剂盒，其特征在于，所述新冠病毒抗原为基因工程重组表达的新冠病毒S2蛋白。 3.根据权利要求1所述的新型冠状病毒IgG抗体酶联免疫检测试剂盒，其特征在于：所述包被缓冲液为含0.02wt%叠氮钠的0.05mol/L、pH9.6碳酸盐缓冲液，按1:500～1:1000的体积比例稀释新冠病毒抗原。 4.根据权利要求1所述的新型冠状病毒IgG抗体酶联免疫检测试剂盒，其特征在于：所述封闭液为含5wt%蔗糖、2wt%液体明胶、0.25wt%干酪素钠、0.1wt%ProClin300的0.07mol/L硼酸-硼砂缓冲液。 5.根据权利要求1所述的新型冠状病毒IgG抗体酶联免疫检测试剂盒，其特征在于：所述样品稀释液为含20wt%山羊血清、0.2wt%干酪素钠、5wt%PEG6000、4wt%蔗糖、0.1wt%ProClin300的10mmol/L、pH7.4PBS。 6.根据权利要求1所述的新型冠状病毒IgG抗体酶联免疫检测试剂盒，其特征在于所述：所述酶标稀释液为含5wt%蔗糖、2wt%液体明胶、0.1wt%氨基比林、1wt%甘油、20wt%小牛血清、0.1wt%ProClin300的0.07mol/L硼酸-硼砂缓冲液。 7.根据权利要求1所述的新型冠状病毒IgG抗体酶联免疫检测试剂盒，其特征在于：所述底物A液为含有0.06wt%pH5.2～5.3的10mmol/L柠檬酸-乙酸钠缓冲液；所述底物B液含有0.06wt%TMB盐酸盐的柠檬酸缓冲液、0.001wt%的硫代硫酸钠和0.02wt%的碳酸钠。 8.根据权利要求1所述的新型冠状病毒IgG抗体酶联免疫检测试剂盒，其特征在于：所述阳性对照液为在样品稀释液中按1:30～1:100的比例加入阳性血清制成，阳性对照液的吸光度值大于1.0；所述阴性对照血清为在样品稀释液中，按5wt%的比例加入阴性血清制成，阴性对照液的吸光度值小于0.1。 9.根据权利要求1所述的新型冠状病毒IgG抗体酶联免疫检测试剂盒，其特征在于：所述终止液成分为1mol/L的硫酸；所述浓缩洗涤液成分为含20wt%NaCl、0.5wt%KCl、3wt%Tween-20的0.25mol/L pH6.0~6.5 PB。 10.一种新型冠状病毒IgG抗体酶联免疫检测方法，其特征在于，包括权利要求1～9任一项所述的新型冠状病毒IgG抗体酶联免疫检测试剂盒，所述检测方法包括以下步骤： S1、样本稀释：将待测血液样本用样品稀释液按1:100稀释； S2、抗原-抗体反应：将已稀释的待测血液样本、阴性对照液、阳性对照以100μL/孔的量分别加入到预包被新冠病毒抗原的包被板的不同孔内，37℃温育60分钟； S3、抗原抗体复合物与酶标抗体反应：弃去反应液，将包被板用浓缩洗涤液洗涤移去未结合的成分，以100μL/孔的量加入酶结合物，37℃温育30分钟； S4、显色：弃去反应液，将包被板用浓缩洗涤液洗涤移去未结合的成分，在包被板每孔各加入底物A液、底物B液50μL，37℃避光显色15分钟； S5、终止反应：在包被板每孔加入50μL的终止液终止反应； S6、吸光度测定：用酶标仪在450nm/630nm波长依序测量包被板各孔的吸光度值； S7、结果分析与判定：通过S6吸光度测定结果验证试验有效性，若阳性对照液吸光度平均值/阴性对照液吸光度平均值≥2.1，则试验成立；通过临界值判定检测结果，临界值=0.15+阴性对照液吸光度平均值，当阴性对照液吸光度平均值<0.05时，按0.05计算；若待测血液样本吸光度值＞临界值，则待测血液样本为阳性结果，若待测血液样本吸光度值＜临界值，则待测血液样本为阴性结果。
所属类别：	发明专利