详情

原文传递用于红细胞的单个细胞标记的试剂盒及其检测方法

专利名称：	用于红细胞的单个细胞标记的试剂盒及其检测方法
摘要：	本发明涉及一种用于质谱流式细胞术中标记细胞的染色液、包含所述染色液的试剂盒及检测方法，及一种红细胞定型液。所述染色液中含有锇酸，所述试剂盒进一步包括细胞特异性金属标记抗体。通过与红细胞定型液合用，本发明的试剂盒特别适用于单个红细胞的标记检测，可用于多种元素在红细胞中单个细胞的分布测定。
专利类型：	发明专利
申请人：	中国科学院生态环境研究中心
发明人：	胡立刚;刘念;王丁一;曲广波;何滨;江桂斌
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T06:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T15:00:00+0805
申请号：	CN202010009183.9
公开号：	CN111157433A
代理机构：	中科专利商标代理有限责任公司
代理人：	宋明;张莹
分类号：	G01N15/14;G01N1/30;G;G01;G01N;G01N15;G01N1;G01N15/14;G01N1/30
申请人地址：	100085 北京市海淀区双清路18号
主权项：	1.用于质谱流式细胞术中细胞(例如红细胞或白细胞)标记的染色液，其含有锇酸，在所述染色液的工作浓度下，所述锇酸的浓度为10-5％～10-4％(w/v)，优选为3×10-5％～7×10-5％(w/v)，更优选为5×10-5％～7×10-5％(w/v)。 2.试剂盒，包含权利要求1所述的染色液，其还进一步包含：金属标记抗体，优选为细胞特异性金属标记抗体。 3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其中：当所述细胞为红细胞时，所述试剂盒还包含红细胞定型液，所述红细胞定型液含有浓度为2％～5％(v/v)，优选为2％～3％(v/v)的戊二醛。 4.根据权利要求2～3中任一项所述的试剂盒，其中，所述细胞特异性金属标记抗体为镧系元素标记抗体(优选为抗小鼠Ter119-镧系元素标记抗体、抗人CD235ab-镧系元素标记抗体、抗小鼠CD45-镧系元素标记抗体或抗人CD45-镧系元素标记抗体中的一种或多种)，任选地，在检测时，共同使用的镧系元素标记抗体中的镧系元素彼此不相同。 5.根据权利要求4所述的试剂盒，其中，所述镧系元素标记抗体中的镧系元素选自La(镧)，Ce(铈)，Pr(镨)，Nd(钕)，Pm(钷)，Sm(钐)，Eu(铕)，Gd(钆)，Tb(铽)，Dy(镝)，Ho(钬)，Er(铒)，Tm(铥)，Yb(镱)，Lu(镥)，钪(Sc)，钇(Y)，优选为Sm(钐)、Pr(镨)。 6.根据权利要求2～5中任一项所述的试剂盒，其进一步包含染色用缓冲液，所述染色用缓冲液为包含0.5％～1％(w/v)的封闭蛋白(如牛血清白蛋白)且不含钙镁离子的缓冲液(优选为pH范围为7.2～7.4的磷酸盐缓冲液，更优选为PBS)。 7.根据权利要求2～6所述的试剂盒，其进一步包含细胞洗液，所述细胞洗液(优选为pH范围为7.2～7.4的磷酸盐缓冲液，更优选为PBS)中不含钙镁离子，优选地，不含该镁离子的磷酸盐缓冲液浓度为0.0067M。 8.权利要求2～7中任一项所述的试剂盒在单个细胞的检测中的应用，其中，优选被检测的细胞中包含红细胞。 9.浓度2％～5％(v/v)的戊二醛溶液在长期保存红细胞中的应用。 10.一种单个细胞元素检测的方法，包括以下步骤：利用浓度为2％～5％(v/v)，优选为2％～3％(v/v)的戊二醛溶液处理细胞；使用锇酸的浓度为10-5～10-4％(w/v)，优选为3×10-5～7×10-5％(w/v)，更优选为5×10-5～7×10-5％(w/v)的染色液标记细胞(其中，优选细胞的浓度为2×106～4×106个/ml)；使用金属标记抗体(优选为细胞特异性金属标记抗体)标记细胞。 11.根据权利要求10所述的方法，其进一步包括下述步骤中的一种或多种：将所述金属标记抗体溶解于权利要求6中定义的染色缓冲液中；使用权利要求6中定义的染色缓冲液洗涤细胞；使用权利要求7中定义的细胞洗液洗涤细胞。
所属类别：	发明专利