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同时检测发酵液中L-高丝氨酸和游离氨基酸的HPLC方法
| 专利名称： | 同时检测发酵液中L-高丝氨酸和游离氨基酸的HPLC方法 |
| 摘要： | 本发明涉及一种同时检测发酵液中L‑高丝氨酸和游离氨基酸的HPLC方法。所述方法是先对发酵液样品进行预处理，接着采用DEEMM衍生化试剂对发酵液样品进行衍生化处理之后，再通过高效液相色谱和通用型C18色谱柱对发酵液中的L‑高丝氨酸和其他游离氨基酸进行分离和测定。本发明的方法使用的配置是高效液相色谱系统的标准液相配置，除了适用于氨基酸分析之外，还可用于其他物质的分析工作，普适性更强，具有检测灵敏度高、样品处理简单、分析时间短、分析结果稳定、重复性好等优点，适用于常规实验室。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 申请人： | 浙江工业大学 |
| 发明人： | 柳志强;刘吉颂;张博;郑裕国 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请日期： | 1900-01-20T19:00:00+0805 |
| 发布日期： | 1900-01-20T12:00:00+0805 |
| 申请号： | CN202010059578.X |
| 公开号： | CN111141856A |
| 代理机构： | 浙江千克知识产权代理有限公司 |
| 代理人： | 冷红梅 |
| 分类号： | G01N30/06;G01N30/02;G;G01;G01N;G01N30;G01N30/06;G01N30/02 |
| 申请人地址： | 310014 浙江省杭州市下城区潮王路18号 |
| 主权项： | 1.一种同时检测发酵液中L-高丝氨酸和游离氨基酸的HPLC方法，其特征在于先对发酵液样品进行预处理，接着采用DEEMM衍生化试剂对发酵液样品进行衍生化处理之后，再通过高效液相色谱和通用型C18色谱柱对发酵液中的L-高丝氨酸和其他游离氨基酸进行分离和测定； 所述预处理方法为：取发酵液样品于离心管中，10000～12000r/min离心2～3min，收集上清液，用于下一步衍生化； 所述衍生化处理方法为：将上清液稀释5～10倍取稀释液，加入硼酸盐缓冲液和0.5％的DEEMM甲醇溶液，温度60～70℃下衍生化1～2h后，用0.22μm有机滤膜过滤，所得滤液进行下一步分离和测定；每200μL稀释液加入350μL的硼酸盐缓冲液和150μL的0.5％DEEMM甲醇溶液。 2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述检测为定量检测，先配制梯度浓度目标物质标准品，按照相应方法进行预处理、衍生化和高效液相色谱检测后，以色谱峰峰面积为横坐标、标准品浓度为纵坐标绘制标准曲线，测得待测样品中目标物质色谱峰面积后，对照标准曲线获得待测样品中目标物质的浓度值。 3.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述高效液相色谱检测条件为：检测仪器：AgilentTechnologies1260InfinityⅡ高效液相色谱系统； 色谱柱：J&KScientificHPLCC-18Column(4.6×250mm，5μm)； 流动相：流动相A为色谱级甲醇；流动相B为25mmol/L乙酸铵溶液，A:B＝40％：60％，流速0.6mL/min； 柱温：25℃； 检测波长：250nm。 4.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述硼酸缓冲液按如下方法配制：称取6.183g硼酸，加入70mL超纯水溶解，用1mol/L的NaOH溶液调pH至9.0，加超纯水定容至100mL。 5.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述DEEMM甲醇溶液按如下方法配制：吸取0.5mLDEEMM于100mL容量瓶中，用色谱级甲醇定容至100mL。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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