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原文传递一种山药酵素液的制备及其中游离氨基酸的检测方法

专利名称：	一种山药酵素液的制备及其中游离氨基酸的检测方法
摘要：	本发明涉及一种具有保健功能的山药酵素产品。一种山药酵素液的制备方法，对制得的山药汁进行发酵处理，加入蔗糖，调节糖浓度为8‑12%，再加入1.0‑1.4%的蛋白胨，搅拌均匀后，调节山药汁的初始pH 5.0；高压灭菌处理，冷却；在山药发酵基质中接种0.1‑0.4%的活化后的酵母菌液，恒温振荡培养，以150 r/min的转速振荡发酵22‑26 h；发酵结束后，再接种1%‑5%的乳酸菌，恒温培养，静置发酵32‑40 h。一种反相高效液相色谱检测山药酵素液中游离氨基酸的方法，取山药酵素液高速离心处理，取上清液密封保存，用于下一步衍生；以DNFB为柱前衍生试剂，使用色谱柱，以流动相A为pH 4.8、浓度为0.05 mol/L的乙酸钠溶液，流动相B为体积比为1：1的乙腈水溶液，梯度程序洗脱50 min对其氨基酸含量进行检测。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	河南;41
申请人：	河南城建学院
发明人：	陈东莹;王艳红;石娇娇;谢朝晖
专利状态：	有效
申请日期：	2019-08-09T00:00:00+0800
发布日期：	2019-10-22T00:00:00+0800
申请号：	CN201910735982.1
公开号：	CN110361476A
代理机构：	郑州金成知识产权事务所(普通合伙)
代理人：	白毅明
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	467036 河南省平顶山市新城区龙翔大道
主权项：	1.一种山药酵素液的制备方法，首先对山药进行清洗、晾干处理，制得山药汁，然后对制得的山药汁进行发酵处理，其特征在于，发酵处理的过程如下： 1）对山药汁进行调配，加入适量蔗糖，调节糖浓度为8-12%，再加入1.0-1.4%的蛋白胨，搅拌均匀后，调节山药汁的初始pH 5.0； 2）高压灭菌处理，温度120-125°C，压力100kpa，灭菌20 min，冷却； 3）在经高压灭菌处理、冷却后的山药发酵基质中接种0.1-0.4%的活化后的酵母菌液，在28 -32°C温度条件下恒温振荡培养，以150 r/min的转速振荡发酵22-26 h； 4）待酵母菌发酵结束后，再接种1-5%的乳酸菌，在33-39°C温度条件下恒温培养，静置发酵32-40 h。 2.根据权利要求1所述的山药酵素液的制备方法，其特征在于：山药汁的制备过程如下： 1）挑选新鲜、无腐烂的山药，洗净后晾干，削皮切成大约2至3厘米的小块，进行护色处理，加入0.6%的柠檬酸、0.4%的植酸、1.25%的氯化钙； 2）称取去皮后的山药质量后，按料液比1：4加纯净水，用打浆机打浆，打浆后，在70°C水浴锅中水浴15 min，冷却后用纱布过滤，即得到山药汁。 3.一种反相高效液相色谱检测山药酵素液中游离氨基酸的方法，其特征在于：包括以下步骤： 1）山药酵素液前处理：取山药酵素液于50 mL离心管中，在高速离心机中以12000 r/min的转速，设置温度20°C，离心时间15 min，取上清液密封保存，用于下一步衍生； 2）标准品及样品的衍生（1）衍生剂为2，4-二硝基氟苯，衍生温度为60°C，避光反应1 h；（2）分别配制与处理氨基酸标准品溶液和样品溶液；（3）反相高效液相色谱检测以2，4-二硝基氟苯为柱前衍生试剂，使用AcclaimTM120 C18色谱柱，以流动相A为pH4.8、浓度为0.05 mol/L的乙酸钠溶液，流动相B为体积比为1：1的乙腈水溶液，流速为1 mL/min，柱温30°C，检测波长为360 nm，进样量：20 μL；梯度程序洗脱50 min对其氨基酸含量进行检测。 4.根据权利要求3所述的反相高效液相色谱检测山药酵素液中游离氨基酸的方法，其特征在于：梯度洗脱程序见表1：时间/min 流动相A% 流动相B% 0 85 15 6 85 15 12 80 20 18 70 30 25 60 40 30 50 50 35 40 60 38 30 70 40 20 80 43 0 100 47 85 15 50 85 15 对衍生后的氨基酸标准液和山药酵素液中氨基酸进行检测，通过紫外和荧光检测，得到色谱图后计算山药酵素液中氨基酸的含量。 5.根据权利要求3或4所述的反相高效液相色谱检测山药酵素液中游离氨基酸的方法，其特征在于：步骤2）标准品及样品的衍生过程为：（1）氨基酸标准品：精密称取各氨基酸标准品200 mg置于100 mL容量瓶中，用pH 9.0的硼酸缓冲溶液溶解并定容至刻度线，混匀，得到2 mg/mL的氨基酸标准液，作为母液，4°C冰箱保存；（2）衍生试剂：用移液枪精确吸取1 mL DNFB加入100 mL的棕色容量瓶中，然后用色谱级乙腈定容至刻度线，混匀，密封，置于4 ℃冰箱避光保存；（3）吸取150 μL氨基酸标准溶液或供试品溶液于2 mL的离心管里，加入0.5 mol/L pH9.0的碳酸氢钠缓冲溶液150 μL，再加入DNFB溶液150 μL，混匀，封口后放入60°C恒温水浴锅中，避光反应1 h；（4）待反应完成后取出，冷却至室温，再加入1.05 mL pH 7.0的磷酸盐缓冲溶液，混匀，静置10 min后，12000 r/min离心5 min，最后取上清液1.5 mL，用0.22 μm有机相针孔过滤器过滤入进样瓶中。
所属类别：	发明专利