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原文传递一种检测汞离子的双重信号放大的荧光传感器及其制备方法

专利名称：	一种检测汞离子的双重信号放大的荧光传感器及其制备方法
摘要：	本发明公开了一种检测汞离子的双重信号放大的荧光传感器及其制备方法。该荧光传感器包括组分a、b、c、d共7种探针，分别为探针S、F、F1、F2、IP、H1和H2；本发明基于汞离子与核酸的特异性识别（“T‑Hg2+‑T”特异性碱基错配）实现燃料刺激等温放大（FSP）一级循环，FSP释放的F2链可以与H1和H2实现链置换催化发卡组装反应（CHA），实现二级循环，最终通过荧光信号增强检测汞离子。本荧光传感器具有检测限低，灵敏度高，反应速度快，抗干扰能力强，反应条件温和等优点，能够弥补现有汞离子检测方法的不足，实现汞离子的快速准确的定量检测。
专利类型：	发明专利
申请人：	闽江学院
发明人：	邢超;王军
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T23:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T19:00:00+0805
申请号：	CN202010076033.X
公开号：	CN111175268A
代理机构：	福州元创专利商标代理有限公司
代理人：	饶文君;蔡学俊
分类号：	G01N21/64;C09K11/06;C12Q1/682;C12Q1/6825;G;C;G01;C09;C12;G01N;C09K;C12Q;G01N21;C09K11;C12Q1;G01N21/64;C09K11/06;C12Q1/682;C12Q1/6825
申请人地址：	350108 福建省福州市闽侯县上街镇溪源宫路200号
主权项：	1.一种检测汞离子的双重信号放大的荧光传感器，其特征在于，包含： a组分：含有探针S、F1和F2； b组分：含有汞离子识别探针IP； c组分：含有燃料探针F； d组分：含有发卡探针H1、荧光染料BHQ-2和FAM修饰的发卡探针H2；所述探针序列分别为： Sequence S： TGGAGACGTAGGGTATTGAATGAGGGCCGTAAGAGAGCTGTAGATTGGATCG； Sequence F1：CCACATACATCATATTCCCTCATTCAATACCCTACG； Sequence F2：CAGTCACTCGATCCAATCTACAGCTCTCTTACGG； Sequence IP：CATTCAATACCCTACGTCTCCA； Sequence F：CGATCCAATCTACAGCTCTCTTACGGCCCTCATTCAATACCCTACG； Sequence H1： CACGAGATACTGTTCCCGATCCAATCTACAGCAGATGTGTACCGCTGTAGATTGGATCGAGTGACTG； Sequence H2：AGATGTGTACCCGATCCAATCTACAGCGGTACACATCTGCTGTAGA； Sequence H2的报告基团为FAM，淬灭基团为BHQ-2。 2.根据权利要求1所述的荧光传感器,其特征在于,探针S、F1和F在组分a中的浓度分别为1 μM、1 μM和1 μM。 3.根据权利要求1所述的荧光传感器,其特征在于, 探针IP在组分中b的浓度为1 μM。 4.根据权利要求1所述的荧光传感器,其特征在于, 探针F在组分c中的浓度为1 μM。 5.根据权利要求1所述的荧光传感器,其特征在于, 探针H1和H2在组分d中的浓度分别为1 μM和1 μM。 6.一种如权利要求1所述的荧光传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）用HEPES 缓冲液配制含有探针S、F1和F2的组分a溶液，30°C保持3小时，使其充分杂交，形成模版DNA杂交体S/F1/F2；（2）用HEPES 缓冲液配制探针IP溶液，即为组分b；（3）用HEPES 缓冲液配制探针F溶液，即为组分c；（4）将发卡探针H1和H2分别进行退火处理；（5）用HEPES 缓冲液配制含探针H1和H2的组分d溶液。 7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述HEPES 缓冲液包含以下终浓度成分：10 mM HEPES, 20 mM 醋酸镁 , 150 mM 醋酸钠, pH 7.4；步骤（4）所述发卡探针的退火程序为：95°C加热5分钟，然后置于冰水中维持30分钟。 8.一种如权利要求1所述的荧光传感器在检测汞离子中的应用，其特征在于，包括以下步骤：（1）将组分a，组分b，组分c与组分d混合均匀；（2）将不同浓度的汞离子标准溶液和待测溶液分别加入到上述溶液混合均匀，在恒温金属浴中30°C保温孵育3小时；（3）从恒温金属浴中取出各组混合溶液，测定各混合溶液的荧光值；（4）根据不同浓度的汞离子标准溶液的荧光值，作汞离子浓度对荧光值的标准曲线，计算回归方程，最后根据待测样品的荧光值计算汞离子浓度。 9.根据权利要求8所述荧光传感器在检测汞离子中的应用，其特征在于，步骤（2）所述荧光值测定的激发波长为488 nm，发射波长为520 nm。 10.根据权利要求8所述荧光传感器在检测汞离子中的应用，其特征在于，汞离子检测浓度为0nM-10nM。
所属类别：	发明专利