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原文传递一种sBCMA磁微粒化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法和应用

专利名称：	一种sBCMA磁微粒化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法和应用
摘要：	本发明提供一种sBCMA磁微粒化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法和应用，包括：偶联链霉亲和素的磁微粒、生物素标记的sBCMA抗体、化学发光标记物标记的sBCMA抗体、sBCMA蛋白校准品、清洗液和激发液。本发明提供的试剂盒在检测sBCMA蛋白时，利用磁微粒作为载体，待测样品、生物素标记的sBCMA抗体和化学发光标记物标记的sBCMA抗体形成“三明治夹心”结构，反应快速，干扰因素较少。同时，通过链霉亲和素和生物素的放大效应，使得所述试剂盒具有较宽的线性范围，且稳定性更好，检测更加便捷，检测结果准确可靠。
专利类型：	发明专利
申请人：	迈杰转化医学研究(苏州)有限公司
发明人：	万振昆;陈才伟;肖彦玲;史文生;张亚飞
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T07:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T19:00:00+0805
申请号：	CN202010082571.X
公开号：	CN111175491A
代理机构：	北京品源专利代理有限公司
代理人：	巩克栋
分类号：	G01N33/543;G01N33/577;G01N33/574;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/543;G01N33/577;G01N33/574
申请人地址：	215000 江苏省苏州市苏州工业园区星湖街218号生物纳米园B5楼901室
主权项：	1.一种sBCMA磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，包括：偶联链霉亲和素的磁微粒、生物素标记的sBCMA抗体、化学发光标记物标记的sBCMA抗体、sBCMA蛋白校准品、清洗液和激发液。 2.根据权利要求1所述的sBCMA磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述化学发光标记物为吖啶酯；优选地，所述生物素标记的sBCMA抗体选自sBCMA蛋白的单克隆抗体和/或多克隆抗体；优选地，所述化学发光标记物标记的sBCMA抗体选自sBCMA蛋白的单克隆抗体和/或多克隆抗体。 3.根据权利要求1或2所述的sBCMA磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述磁微粒为四氧化三铁微粒；优选地，所述磁微粒的表面覆盖有亲水性聚合物涂层和羧基官能团；优选地，所述磁微粒的粒径为0.5～3μm。 4.根据权利要求1-3任一项所述的sBCMA磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述激发液包括激发液1和激发液2，所述激发液1包含硝酸和过氧化氢，所述激发液2包含氢氧化钠和表面活性剂；优选地，所述激发液1为含有硝酸和过氧化氢的水溶液；优选地，所述硝酸的摩尔浓度为0.05～1M；优选地，所述过氧化氢的质量浓度为0.2～3％。 5.根据权利要求1-4任一项所述的sBCMA磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述激发液2为含有氢氧化钠和表面活性剂的水溶液；优选地，所述氢氧化钠的摩尔浓度为0.1～1M；优选地，所述表面活性剂的质量浓度为0.5～4％；优选地，所述表面活性剂为Triton X-100。 6.根据权利要求1-5任一项所述的sBCMA磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述sBCMA蛋白校准品的浓度为0～1000ng/mL；优选地，所述sBCMA磁微粒化学发光免疫检测试剂盒中包含6～10种不同浓度的sBCMA蛋白校准品；优选地，所述清洗液为Tris缓冲液；优选地，所述清洗液的pH为7.3-7.5，优选为7.4；优选地，所述清洗液中含有无机盐、表面活性剂或抑菌剂中的任意一种或两种以上的组合。 7.一种如权利要求1-6任一项所述的sBCMA磁微粒化学发光免疫检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤： (1)将磁微粒活化后加入链霉亲和素反应，制备偶联有链霉亲和素的磁微粒； (2)制备生物素标记的sBCMA抗体和化学发光标记物标记的sBCMA抗体，而后配制激发液、清洗液和sBCMA蛋白校准品，得到所述sBCMA磁微粒化学发光免疫检测试剂盒。 8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述活化使用的活化剂为EDC；优选地，步骤(1)所述活化的时间为20～40min；优选地，步骤(1)所述加入链霉亲和素反应的时间为1～3h；优选地，步骤(1)所述加入链霉亲和素反应的温度为23～28℃；优选地，步骤(1)所述加入链霉亲和素反应后还包括加入封闭液封闭的操作；优选地，步骤(2)所述制备生物素标记的sBCMA抗体的方法为：将sBCMA抗体与生物素混合，而后加入碳酸盐缓冲液反应1～2h得到所述生物素标记的sBCMA抗体；优选地，所述sBCMA抗体和生物素的分子数比为1:(10～20)；优选地，制备得到所述生物素标记的sBCMA抗体后还包括透析的操作；优选地，步骤(2)所述制备化学发光标记物标记的sBCMA抗体的方法为：将sBCMA抗体与化学发光标记物混合，而后加入碳酸盐缓冲液反应1～2h得到所述化学发光标记物标记的sBCMA抗体；优选地，制备得到所述化学发光标记物标记的sBCMA抗体后还包括透析的操作。 9.根据权利要求7或8所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤： (1)先使用偶联缓冲液清洗并重悬磁微粒，再使用EDC活化20～40min，而后加入链霉亲和素23～28℃下震荡反应1～3h，制备得到偶联有链霉亲和素的磁微粒，再加入封闭液进行封闭； (2)将sBCMA抗体与生物素混合，而后加入碳酸盐缓冲液反应1～2h，在2～8℃下透析后得到所述生物素标记的sBCMA抗体， (3)将sBCMA抗体与化学发光标记物混合，而后加入碳酸盐缓冲液反应1～2h，在2～8℃下透析后得到所述化学发光标记物标记的sBCMA抗体； (4)配制激发液、清洗液和sBCMA蛋白校准品，得到所述sBCMA磁微粒化学发光免疫检测试剂盒。 10.如权利要求1-6任一项所述的sBCMA磁微粒化学发光免疫检测试剂盒在检测sBCMA中的应用。
所属类别：	发明专利