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原文传递一种免疫胶体金混合标记法

专利名称：	一种免疫胶体金混合标记法
摘要：	本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种免疫胶体金混合标记法，具体包括下述步骤：步骤一、调整pH值；步骤二、添加结合物，将预定量的C线抗体添加在结合物中；步骤三、封闭；步骤四、添加稳定剂。本发明的免疫胶体金混合标记法，构建了仅与真C线结合的C线抗体，提高了免疫胶体金标记后无真C线结合能力的材料(受体或抗体)灵敏度，同时降低了假阳性。
专利类型：	发明专利
申请人：	北京纳百生物科技有限公司
发明人：	杨春江;袁志波;马孝斌
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T14:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T12:00:00+0805
申请号：	CN202010091698.8
公开号：	CN111141900A
分类号：	G01N33/532;G01N33/577;G01N33/558;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/532;G01N33/577;G01N33/558
申请人地址：	100000 北京市大兴区北京经济技术开发区科创十四街11号3号楼
主权项：	1.一种免疫胶体金混合标记法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一、调整pH值；步骤二、添加结合物，将预定量的C线抗体添加在结合物中；步骤三、封闭；步骤四、添加稳定剂。 2.根据权利要求1所述的免疫胶体金混合标记法，其特征在于：所述C线抗体的筛选过程如下：步骤2-1，采用预定量的封闭蛋白包被酶标板；步骤2-2，制备封闭蛋白单克隆抗体，培养上清1000倍稀释，OD值大于2.0；步骤2-3，采用预定量的免疫胶体金直接标记，pH7.8～9.0；步骤2-4，NC膜制备，T线加入预定量的封闭蛋白，C线加入预定量的羊抗鼠抗体，加入预定量的划膜液，然后进行烘膜；步骤2-5，筛选条件：ELISA与封闭蛋白亲和力强，血清效价10万以上；与其他封闭蛋白无交叉反应；5ug/ml直接标记，10ul湿金，免疫胶体金T线不显色，C线显色强度大于1200，筛选得到C线抗体。 3.根据权利要求1或2所述的免疫胶体金混合标记法，其特征在于：步骤一中：添加K2CO3调整pH值。 4.根据权利要求1或2所述的免疫胶体金混合标记法，其特征在于：步骤二中，C线抗体的浓度是0.5～4.0ug/ml。 5.根据权利要求1或2所述的免疫胶体金混合标记法，其特征在于：步骤三中，添加BSA进行封闭。 6.根据权利要求2所述的免疫胶体金混合标记法，其特征在于：步骤2-3中，免疫胶体金的用量为5ug/ml。 7.根据权利要求2所述的免疫胶体金混合标记法，其特征在于：步骤2-3中，采用0.2M K2CO3添加量0.25～10ul进行pH值调节。 8.根据权利要求2所述的免疫胶体金混合标记法，其特征在于：步骤2-4中，T线加入0.5mg/ml封闭蛋白，C线加入0.5mg/ml羊抗鼠抗体，划膜液0.05MPBS，烘膜条件是40℃24h。
所属类别：	发明专利