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原文传递一种斑马鱼胚胎心脏免疫荧光标记法

专利名称：	一种斑马鱼胚胎心脏免疫荧光标记法
摘要：	本发明公开了一种斑马鱼胚胎心脏免疫荧光标记法，其特征在于，包括以下步骤：S1、取干净载玻片用荧光记号笔画直径为1cm的圆圈，在圆圈中加入多聚甲醛，将载玻片放入湿盒中；S2、固定斑马鱼心脏；S3、洗涤；S4、封闭；S5、重复步骤S3；S6、加入一抗，4℃孵育过夜；S7、次日室温放置湿盒；S8、重复步骤S3；S9、加入二抗，室温避光孵育；S10、重复步骤S3；S11、在荧光显微镜或激光共聚焦下成像，拍照记录结果。本发明解决了整鱼做免疫荧光时心脏染不上色，PBST洗涤过程中心脏容易丢失，二抗体孵育后样本不能长期保存以及抗体使用量大的问题，此方法操作简单、抗体用量少、封片后样本可保存两周，在显微镜下直接观察心脏个体，保证了实验的准确性。
专利类型：	发明专利
申请人：	苏州大学
发明人：	陈涛;黄玉洁;陶怡舟;任斐
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T17:00:00+0805
申请号：	CN201911371895.9
公开号：	CN111024935A
代理机构：	苏州谨和知识产权代理事务所(特殊普通合伙)
代理人：	唐静芳
分类号：	G01N33/53;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/53
申请人地址：	215123 江苏省苏州市相城区济学路8号
主权项：	1.一种斑马鱼胚胎心脏免疫荧光标记法，其特征在于，包括以下步骤： S1、取干净载玻片用荧光记号笔画直径为1cm的圆圈，在圆圈中加入50μl4％多聚甲醛，将载玻片放入湿盒中； S2、在显微镜下取斑马鱼心脏放入4％多聚甲醛中固定； S3、洗涤； S4、取50μl，5％BSA加入载玻片圆圈中，放入湿盒中封闭； S5、封闭后重复步骤S3； S6、加入50μl PBST配置的一抗，将载玻片放进湿盒中，4℃孵育过夜； S7、次日室温放置湿盒，便于抗体结合； S8、恢复至室温后重复步骤S3； S9、加入50μl PBST配置的带有荧光标记物的二抗，室温避光孵育； S10、在显微镜下重复步骤S3； S11、加入20μl的荧光猝灭剂，将圆圈中的心脏在荧光显微镜或激光共聚焦下成像，拍照记录结果。 2.如权利要求1所述的斑马鱼胚胎心脏免疫荧光标记法，其特征在于，步骤S2所述的待测样品固定后在显微镜下吸弃4％多聚甲醛，室温干燥，使其完全贴在载玻片上，便于后续洗涤。 3.如权利要求1所述的斑马鱼胚胎心脏免疫荧光标记法，其特征在于，步骤S11所述的待测样品中加入的荧光猝灭剂为DAPI，然后于所述待测样品上盖上干净的盖玻片后，用密封剂封住盖玻片四周，待其干燥。 4.如权利要求1所述的斑马鱼胚胎心脏免疫荧光标记法，其特征在于，步骤S6所述的待测样品孵育过程不超过16小时。 5.如权利要求1至4任一项所述的斑马鱼胚胎心脏免疫荧光标记法，其特征在于，步骤S3所述洗涤过程包括待测样品干燥后在显微镜下加入50μlPBST，后吸弃。 6.如权利要求1所述的斑马鱼胚胎心脏免疫荧光标记法，其特征在于，所述一抗为8-OHdG antibody。 7.如权利要求1所述的斑马鱼胚胎心脏免疫荧光标记法，其特征在于，所述带有荧光标记物的二抗为FITC Goat Anti-mouse IgG。
所属类别：	发明专利