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原文传递妊娠相关蛋白A磁微粒化学发光检测试剂盒及其使用方法

专利名称：	妊娠相关蛋白A磁微粒化学发光检测试剂盒及其使用方法
摘要：	本发明公开了医疗器械生物类免疫体外诊断相关技术领域的妊娠相关蛋白A磁微粒化学发光检测试剂盒及其使用方法；包括相互独立包装的荧光素标记的PAPP‑A抗体的溶液、碱性磷酸酶标记的PAPP‑A抗体的溶液、包被荧光素抗体的磁微粒悬浮液、PAPP‑A校准品、发光底物的溶液；本发明将磁微粒技术和化学发光技术相结合，提供了一种趋于均相的反应体系；能够以更高准确度、特异性、精密度和更低成本对妊娠相关蛋白A(PAPP‑A)进行定量检测。
专利类型：	发明专利
申请人：	江苏泽成生物技术有限公司
发明人：	王赟;刘振世
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T19:00:00+0805
申请号：	CN202010125618.6
公开号：	CN111175496A
代理机构：	上海联科律师事务所
代理人：	赵旭
分类号：	G01N33/543;G01N33/577;G01N33/533;G01N33/535;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/543;G01N33/577;G01N33/533;G01N33/535
申请人地址：	214400 江苏省无锡市江阴市东盛西路6号(扬子江生物医药加速器A4-1)
主权项：	1.妊娠相关蛋白A磁微粒化学发光检测试剂盒，其特征在于：包括相互独立包装的荧光素标记的PAPP-A抗体的溶液、碱性磷酸酶标记的PAPP-A抗体的溶液、包被荧光素抗体的磁微粒悬浮液、PAPP-A校准品、发光底物的溶液。 2.根据权利要求1所述的妊娠相关蛋白A磁微粒化学发光检测试剂盒，其特征在于：所述碱性磷酸酶标记的PAPP-A抗体由碱性磷酸酶与PAPP-A抗体通过交联剂辛二酸二琥珀酰亚胺酯连接而成。 3.根据权利要求1所述的妊娠相关蛋白A磁微粒化学发光检测试剂盒，其特征在于：所述荧光素标记的PAPP-A抗体的溶液浓度为0.8～1.2μg/ml，pH为7～9。 4.根据权利要求1所述的妊娠相关蛋白A磁微粒化学发光检测试剂盒，其特征在于：所述碱性磷酸酶标记的PAPP-A抗体的溶液浓度为0.5～0.8μg/ml，pH为7～9。 5.根据权利要求1所述的妊娠相关蛋白A磁微粒化学发光检测试剂盒，其特征在于：所述荧光素标记的PAPP-A抗体的溶液通过包括以下步骤的操作制备而成： Sa1：配置Tris-HCl缓冲液，使所述Tris-HCl缓冲液中含有4～8wt％的PEG-6000、0.7～0.9wt％的NaCl、0.08～0.1wt％的叠氮钠、0.58～0.62wt％的ProClin-300、0.8～1wt％牛血清白蛋白和19～21mM的EDTA，调节所述Tris-HCl缓冲液的pH为7～9； Sa2：向所述Tris-HCl缓冲液中加入所述Tris-HCl缓冲液体积0.6～0.8％的PAPP-A抗体充分混合，室温静置反应； Sa3：将Sa2制得的反应液通过凝胶柱，调节浓度和pH即得。 6.根据权利要求1所述的妊娠相关蛋白A磁微粒化学发光检测试剂盒，其特征在于：所述碱性磷酸酶标记的PAPP-A抗体的溶液通过包括以下步骤的操作制备而成： Sb1：用二甲基亚砜溶剂将PAPP-A抗体溶解为30～60mg/ml浓度的溶液并加入交联剂辛二酸二琥珀酰亚胺酯，混合均匀，室温反应2～3h；用二甲基亚砜溶剂将PAPP-A抗体与辛二酸二琥珀酰亚胺酯的连接物的浓度稀释8～10倍，2～8℃条件下保存； Sb2：用含有1～2mg/ml碱性磷酸酶的碱性磷酸酶缓冲液，按照碱性磷酸酶与所述连接物的摩尔比为1:(1.8～2.2)的用量将所述碱性磷酸酶与所述连接物混合均匀，室温反应1～2h； Sb3：将Sb2制得的反应液通过G-25凝胶柱，调节浓度和pH即得。 7.根据权利要求1所述的妊娠相关蛋白A磁微粒化学发光检测试剂盒，其特征在于：所述包被荧光素抗体的磁微粒悬浮液通过包括以下步骤的操作制备而成：在偶联剂碳二亚胺的环境下，将含有羧基活性基团的磁微粒与荧光素抗体混合均匀，室温反应10～20h，磁分离，除上清液，调节浓度和pH即得；所述磁微粒具有超顺磁性，且每克所述磁微粒上所带的羧基活性基团含量不小于0.5mml；所述荧光素抗体为单克隆抗体，且稀释效价大于1:100万。 8.根据权利要求1所述的妊娠相关蛋白A磁微粒化学发光检测试剂盒，其特征在于：所述发光底物为Lumi-pHos480、金刚烷、鲁米诺及其衍生物、异鲁米诺及其衍生物、吖啶酯中的一种或多种。 9.根据权利要求1所述的妊娠相关蛋白A磁微粒化学发光检测试剂盒，其特征在于：所述发光底物的溶液通过包括以下步骤的操作制备而成：准确称量2g的TRIS、6gNaCl、0.005gNa2SO3和0.5mlProClin-300分别加入600ml纯化水中并充分溶解，调节pH至7.5；加200ml的发光底物，用0.2μm滤器过滤后再用纯化水定容至1000ml即得。 10.如权利要求1～9任一项所述的妊娠相关蛋白A磁微粒化学发光检测试剂盒的使用方法，其特征在于：包括如下步骤： Sc1：免疫反应：在反应管中加入待检测样本，依次加入所述荧光素标记的PAPP-A抗体的溶液和所述碱性磷酸酶标记的PAPP-A抗体的溶液混匀，在20～40℃下温育30min，制得双抗原夹心复合物的溶液；向所述双抗原夹心复合物的溶液中加入所述包被荧光素抗体的磁微粒悬浮液混匀，20～40℃下温育30min，将所述双抗原夹心复合物固定在磁性微球上； Sc2：洗涤：向Sc1制备的溶液中加清洗液，震荡，使磁微粒在磁场中沉降，除上清并去除掉没有通过待测抗体形成双抗原夹心复合物的连接标记示踪物的抗原；重复本步操作0～5次； Sc3：加底物检测：在反应管中加入碱性磷酸酶催化的所述发光底物的溶液，充分混匀，检测发光值，计算得到妊娠相关蛋白A的含量。
所属类别：	发明专利