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原文传递一种磁微粒化学发光法地高辛测定试剂盒及其使用方法

专利名称：	一种磁微粒化学发光法地高辛测定试剂盒及其使用方法
摘要：	本发明公开了生物化学相关技术领域的一种磁微粒化学发光法地高辛测定试剂盒及其使用方法，包括相互独立包装的荧光素地高辛鼠单克隆抗体、碱性磷酸酶标记地高辛衍生物、鼠抗荧光素单克隆抗体磁珠、校准品和质控品；采用磁微粒碱性磷酸酶酶促化学发光法在临床上检测血药浓度中的地高辛，具有方法简便、自动化强、时间短、试剂稳定时间长的优点。
专利类型：	发明专利
申请人：	江苏泽成生物技术有限公司
发明人：	陈海生;刘振世;李婷婷;邵飞飞;杨志刚;付思扬;迟媛媛
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T19:00:00+0805
申请号：	CN202010125619.0
公开号：	CN111175497A
代理机构：	上海联科律师事务所
代理人：	赵旭
分类号：	G01N33/543;G01N33/577;G01N33/533;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/543;G01N33/577;G01N33/533
申请人地址：	214400 江苏省无锡市江阴市东盛西路6号(扬子江生物医药加速器A4-1)
主权项：	1.一种磁微粒化学发光法地高辛测定试剂盒，其特征在于：包括相互独立包装的荧光素地高辛鼠单克隆抗体、碱性磷酸酶标记地高辛衍生物、鼠抗荧光素单克隆抗体磁珠、校准品和质控品；所述荧光素地高辛鼠单克隆抗体通过包括以下步骤的操作制得： Sa1：准确称取0.4～0.6mg地高辛鼠单克隆抗体； Sa2：准确称取2.4～3.6mg荧光素，并用第一碳酸钠溶液进行溶解至终浓度为0.8～1.2mg/ml，制得荧光素溶液； Sa3：在所述地高辛鼠单克隆抗体中加入20～24ul所述荧光素溶液，充分混匀后在2～8℃反应9～12h； Sa4：用透析袋对Sa3制得的产物透析后，用抗试剂缓冲液将透析产物稀释，制得第一工作液即得；所述碱性磷酸酶标记地高辛衍生物通过包括以下步骤的操作制得： Sb1：将地高辛衍生物用第二碳酸钠溶液进行透析，然后用2-IT活化剂进行活化； Sb2：将碱性磷酸酶用SMCC进行活化； Sb3：将活化后的抗原和鼠抗荧光素单克隆抗体分别与经过活化的碱性磷酸酶按照摩尔比1：1～1:1.5充分混合后在2～8℃下反应18～22h，制得抗体-碱磷酶； Sb4：将所述抗体-碱磷酶用层析柱进行纯化，收集I峰和II峰进行混合； Sb5：用所述抗试剂缓冲液将所述抗体-碱磷酶稀释，制得第二工作液即得；所述鼠抗荧光素单克隆抗体磁珠通过包括以下步骤的操作制得： Sc1：准确称取80～102mgNHS磁珠并定容到20mL； Sc2：准确称取2.4～3.6mg鼠抗荧光素单克隆抗体，投入Sc1制得的溶液中，充分混匀后在2～8℃下反应12～18h； Sc3：用磁珠缓冲液将经过NHS磁珠Sc2稀释，制得第三工作液即得；所述校准品通过包括以下步骤的操作制得： Sd1：配制地高辛校准品缓冲液：向TRIS缓冲液中加入所述TRIS缓冲液重量0.5～5％的牛血清白蛋白和0～0.2％的防腐剂； Sd2：将地高辛纯品用所述地高辛校准品缓冲液进行稀释，制得第四工作液即得。 2.根据权利要求1所述的磁微粒化学发光法地高辛测定试剂盒，其特征在于：所述第一碳酸钠溶液的浓度为0.2M，pH为9.0。 3.根据权利要求1所述的磁微粒化学发光法地高辛测定试剂盒，其特征在于：所述透析袋的截留分子量为5000。 4.根据权利要求1所述的磁微粒化学发光法地高辛测定试剂盒，其特征在于：所述第一工作液的浓度为0.5ug/ml、1ug/ml和3ug/ml。 5.根据权利要求1所述的磁微粒化学发光法地高辛测定试剂盒，其特征在于：所述第二碳酸钠溶液的浓度为0.1～0.2M，pH为8.0。 6.根据权利要求1所述的磁微粒化学发光法地高辛测定试剂盒，其特征在于：所述第二工作液的浓度为1ug/ml、3ug/ml、和5ug/ml。 7.根据权利要求1所述的磁微粒化学发光法地高辛测定试剂盒，其特征在于：Sc1中，在进行定容操作前先用0.2M的PBS进行将所述NHS磁珠清洗1～3遍。 8.根据权利要求1所述的磁微粒化学发光法地高辛测定试剂盒，其特征在于：所述第三工作液的浓度为1mg/ml。 9.根据权利要求1所述的磁微粒化学发光法地高辛测定试剂盒，其特征在于：所述第四工作液的浓度为0ng/ml、0.5ng/ml、1ng/ml、2ng/ml、5ng/ml和10ng/ml。 10.如权利要求1～9任一项所述的磁微粒化学发光法地高辛测定试剂盒的使用方法，其特征在于：包括以下步骤： Se1：准确量取待测样本50ul、所述荧光素地高辛鼠单克隆抗体50ul和所述碱性磷酸酶标记地高辛衍生物50ul，充分混合后孵育15min； Se2：向Se1制得的产物中加入所述鼠抗荧光素单克隆抗体磁珠50ul，孵育5min； Se3：将Se2制得的产物磁分离2min，去除上清； Se4：用洗液将Se3制得的产物洗涤3次，每次用300ul洗液； Se5：用所述校准品将Se4制得的底物定容至200ul，测值。
所属类别：	发明专利