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原文传递一种微流控芯片检测外泌体GPC1蛋白的方法及其在胰腺癌早期诊断中的应用

专利名称：	一种微流控芯片检测外泌体GPC1蛋白的方法及其在胰腺癌早期诊断中的应用
摘要：	本发明提供一种微流控芯片检测外泌体GPC1蛋白的试剂盒包括微流控芯片，所述微流控芯片包括基底层和位于基层上的顶层，上下两层相连通；基底层和顶层均设有微流通道和孔，微流通道与孔相连通，底层和顶层通过混合流道相通；基底层和顶层分别设有加样孔、反应孔、检测孔、质控孔、废液排出孔；基底层的反应孔包被半乳糖凝聚物‑1的单克隆抗体或抗GPC1的IgG抗体；所述基底层的加样孔和反应孔喷涂聚乙二醇PEG6000聚合物；基底层的反应孔固化有捕获纳米磁珠，所述磁珠与量子点标记外泌体抗GPC1特异性抗体的偶联。通过与其配套设备的量子点荧光免疫分析系统检测技术相结合，本发明方法灵敏度高、所需样本量小，检测所用设备成本低、可高通量、特异性高、准确度高。
专利类型：	发明专利
申请人：	何凤屏
发明人：	何凤屏
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T07:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
申请号：	CN202010014382.9
公开号：	CN111208297A
代理机构：	广州三环专利商标代理有限公司
代理人：	郝传鑫;王兰兰
分类号：	G01N33/58;G01N33/577;G01N33/574;G01N33/543;B01L3/00;G;B;G01;B01;G01N;B01L;G01N33;B01L3;G01N33/58;G01N33/577;G01N33/574;G01N33/543;B01L3/00
申请人地址：	512026 广东省韶关市武江区沿江路8号G-1栋301号
主权项：	1.一种微流控芯片检测外泌体GPC1蛋白的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括含有微流控芯片，所述微流控芯片包括基底层和位于基层上的顶层，上下两层相连通；基底层和顶层均设有微流通道和孔，微流通道与孔相连通，底层和顶层通过混合流道相通；基底层和顶层分别设有加样孔、反应孔、检测孔、质控孔、废液排出孔；所述基底层的反应孔包被半乳糖凝聚物-1的单克隆抗体或抗GPC1的IgG抗体；所述基底层的加样孔(11)和反应孔(12、13)喷涂聚乙二醇PEG6000聚合物，每孔喷涂聚乙二醇PEG6000聚合物10μl；所述基底层的反应孔固化有捕获纳米磁珠，所述磁珠与量子点标记外泌体抗GPC1特异性抗体的偶联。 2.如权利要求1所述的微流控芯片检测外泌体GPC1蛋白的试剂盒，其特征在于，所述基底层有2个反应孔，第一反应孔包被半乳糖凝聚物-1的单克隆抗体，第二反应孔包被抗GPC1的IgG抗体。 3.如权利要求1所述的微流控芯片检测外泌体GPC1蛋白的试剂盒，其特征在于，所述孔的直径均为1.5～5.5毫米，深度均为80～1000微米；所述微通道长度为6～18毫米，宽度为80～800微米，深度为100～2200微米。 4.如权利要求1所述的微流控芯片检测外泌体GPC1蛋白的试剂盒，其特征在于，所述微流控芯片的驱动力为注射泵。 5.如权利要求1所述的微流控芯片检测外泌体GPC1蛋白的试剂盒，其特征在于，所述微流控芯片的材料包括高分子聚合物聚二甲基硅氧烷醇(PDMS)、聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)、玻璃、聚碳酸酯(PC)或环烯烃共聚物树脂(COC)。 6.如权利要求1所述的微流控芯片检测外泌体GPC1蛋白的试剂盒，其特征在于，所述微流控芯片的材料为二甲基硅氧烷醇(PDMS)。 7.一种与权利要求1所述的微流控芯片检测外泌体GPC1蛋白的试剂盒配套使用的量子点荧光免疫分析系统，其特征在于，包括芯片驱动平台和光电检测系统；所述光电检测系统包括LED光源、光电转换器、光电传感器，信号处理系统，计算机分析系统，注射泵控制系统的主要检测部件组成。 8.如权利要求6所述的量子点荧光免疫分析系统，其特征在于，所述量子点荧光要求激发波长在400～550范围，发射波长在550～650范围。 9.一种采用权利要求1所述的微流控芯片荧光免疫快速检测试剂盒检测外泌体GPC1蛋白的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤： (1)将待测物质溶液加入到微流控芯片的顶层加样孔中，通过注射驱动待测溶液到达至反应孔，待测物质中的外泌体被基底层反应孔中的半乳糖凝聚物-1的单克隆抗体捕获与富集； (2)在流体驱动下，继续将反应孔中的溶液全部输送至后一反应孔中，在顶层的反应孔中加入量子点荧光标记抗体的免疫磁珠，与基底层反应孔包被的抗GPC1的IgG抗体进行免疫反应，形成外泌体GPC1抗原-量子点荧光标记抗GPC1抗体-磁珠微球的免疫复合物； (3)在外加磁场的作用下，磁性复合物被吸附在反应检测槽的底部，在离心驱动下，将不含磁性微球的溶液输送到废液池，磁性荧光复合物则留在检测孔； (4)通过荧光检测仪检测，以一定波长的光照射反应检测槽中的磁性荧光微球复合物，检测荧光微球的发光强度，荧光强度与待测物浓度呈相关性。 10.如权利要求1所述的检测外泌体GPC1蛋白的方法，其特征在于，检测荧光微球的发光波长范围为400～550，发射波长范围为550～650；所述量子点荧光标记抗体的免疫磁珠中使用的量子点为水溶性带羧基的活化量子点；所述免疫磁珠为带有环氧基团的纳米磁珠，其直径为2.0～6.0μm。
所属类别：	发明专利