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原文传递利用高效液相色谱和液质联用色谱鉴别金银花和山银花的方法

专利名称：	利用高效液相色谱和液质联用色谱鉴别金银花和山银花的方法
摘要：	本发明属于中药材来源品种鉴定技术领域，涉及利用高效液相色谱和液质联用色谱鉴别金银花和山银花的方法。采用本发明，当供试品为金银花或山银花中的一种或两种时，通过高效液相色谱检测供试品干燥品中断马钱子酸和绿原酸的重量百分比，并计算绿原酸与断马钱子酸重量百分比的比值；通过液质联用色谱检测供试品干燥品中川续断皂苷乙的重量百分比；利用绿原酸与断马钱子酸重量百分比的比值和川续断皂苷乙的重量百分比来鉴别金银花。本发明不受供试品性状限制，可用于金银花、山银花单一药材或两者混合物的鉴别，也可用于中成药中金银花、山银花单一药材或两者混合物的鉴别，有效提高鉴别准确度，为药品生产、流通、使用过程提供了鉴别真假的依据。
专利类型：	发明专利
申请人：	山东中医药大学
发明人：	张芳;张永清;郑冰清;张龙霏;石鹏亮;于晓;徐文流;翁少全
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T14:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
申请号：	CN202010035797.4
公开号：	CN111198236A
代理机构：	济南克雷姆专利代理事务所(普通合伙)
代理人：	杨婷
分类号：	G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/36;G01N30/72;G01N30/74;G01N30/86;G;G01;G01N;G01N30;G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/36;G01N30/72;G01N30/74;G01N30/86
申请人地址：	250355 山东省济南市长清区大学科技园大学路4655号
主权项：	1.利用高效液相色谱和液质联用色谱鉴别金银花和山银花的方法，其特征在于，当供试品为金银花或山银花中的一种或两种时，通过高效液相色谱检测供试品干燥品中断马钱子酸和绿原酸的重量百分比，并计算绿原酸与断马钱子酸重量百分比的比值；通过液质联用色谱检测供试品干燥品中川续断皂苷乙的重量百分比；利用绿原酸与断马钱子酸重量百分比的比值和川续断皂苷乙的重量百分比来鉴别金银花中是否混入山银花。 2.根据权利要求1所述的鉴别金银花和山银花的方法，其特征在于，当供试品干燥品中绿原酸与断马钱子酸重量百分比的比值小于2，且川续断皂苷乙的重量百分比为0时，判定为金银花。 3.根据权利要求1或2所述的鉴别金银花和山银花的方法，其特征在于，所述绿原酸与断马钱子酸的含量的检测方法为：取对照品溶液与供试品溶液，注入高效液相色谱仪，于210～360nm波长处测定峰面积，采用外标法或标准曲线法计算，得到供试品中绿原酸与断马钱子酸的重量百分比，然后计算两者比值；所述川续断皂苷乙的含量的检测方法为：取对照品溶液与供试品溶液，注入液质联用色谱仪，利用液相分离，质谱测定特征离子的面积，采用外标法或标准曲线法计算，得到供试品中川续断皂苷乙的重量百分比。 4.根据权利要求3所述的鉴别金银花和山银花的方法，其特征在于， (1)所述高效液相色谱法的测定条件为：色谱柱C18，4.6mm×250mm，5μm；波长240-324nm；以乙腈为流动相A，以pH值为1.5～4的酸的水溶液为流动相B，采用梯度洗脱，其中流动相A 0～20min，体积百分比5％→15％；20～30min，体积百分比15％→28％；其余为流动相B； (2)所述液质联用色谱法的测定条件为：液相部分色谱柱：C18色谱柱，10mm×2.1mm，1.7μm；柱温：45℃；流速：0.3mL/min；进样体积：1μL；流动相：以0.1％甲酸(含10mmol/L甲酸铵)溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，采用梯度洗脱，其中流动相A0～3min，体积百分比92％，3～5min，体积百分比92％→35％，5～8min，体积百分比35％→15％，8～10min，体积百分比15％；其余为流动相B；质谱离子源模式：电喷雾离子源；扫描模式：选择离子检测；电离电压：3500V；雾化室温度：200℃；鞘气：高纯氮气，35L/min；辅助气：高纯氮气，10L/min；离子传输管温度：290℃；碰撞气：高纯氩气；采用负离子采集川续断皂苷乙，其质荷比母离子为1075.0，子离子为749.2，碰撞能量，40eV。 5.根据权利要求4所述的鉴别金银花和山银花的方法，其特征在于，所述的酸为磷酸或甲酸或乙酸或磷酸盐。 6.根据权利要求4所述的鉴别金银花和山银花的方法，其特征在于，所述的波长为断马钱子酸检测波长为240nm，绿原酸检测波长为324nm。 7.根据权利要求3所述的鉴别金银花和山银花的方法，其特征在于， (1)所述绿原酸与断马钱子酸的含量的检测方法中的供试品溶液的制备方法为：取供试品粉末0.05-0.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入溶剂10-50mL，超声处理15-60分钟，摇匀，过滤，即得。 (2)所述川续断皂苷乙的含量的检测方法中的供试品溶液的制备方法为：取供试品，粉碎成细粉，取约0.1-0.5g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入85％甲醇20-50mL，精密称重，室温下超声提取15-60min，冷却后，精密称重，用85％甲醇补足重量，滤过，取续滤液用0.22μm滤膜过滤，即得。 8.根据权利要求7所述的鉴别金银花和山银花的方法，其特征在于，所述超声的功率为250W，频率35kHz。 9.根据权利要求7所述的鉴别金银花和山银花的方法，其特征在于，所述溶剂为水或0-50％乙醇溶液或0-50％甲醇溶液或其混合物。
所属类别：	发明专利