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原文传递一种用于新型冠状病毒检测的稀土上转换荧光纳米试纸条及其制备方法

专利名称：	一种用于新型冠状病毒检测的稀土上转换荧光纳米试纸条及其制备方法
摘要：	本发明涉及用于新型冠状病毒检测的稀土上转换荧光纳米试纸条及其制备方法，硝酸纤维素膜包被有检测T线和质控C线；结合物垫为抗原‑上转换材料结合物垫；检测T线由并排间隔设置的第一检测线T1和第二检测线T2组成，第一检测线T1为固定有新型冠状病毒抗体IgM的特异性抗体的分析膜；第二检测线T2为固定有新型冠状病毒抗体IgG的特异性抗体的分析膜；质控线C为固定有新冠病毒抗原特异性抗体的分析膜，可通过观察对应位置条带显现判断是否有新冠病毒IgM和IgG抗体以分析感染情况。本技术方案能够提供一种特异性强、结果更加准确、操作简单、灵敏度高且适合床边进行快速诊断的用于新型冠状病毒检测的稀土上转换荧光纳米试纸条及其制备方法。
专利类型：	发明专利
申请人：	南京申基医药科技有限公司
发明人：	童坤;魏在荣;黄广涛;胡海明;陈峰
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T22:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T22:00:00+0805
申请号：	CN202010109363.4
公开号：	CN111190012A
分类号：	G01N33/58;G01N33/569;G01N33/558;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/58;G01N33/569;G01N33/558
申请人地址：	210000 江苏省南京市栖霞区仙林大学城纬地路9号C6幢309室
主权项：	1.一种用于新型冠状病毒检测的稀土上转换荧光纳米试纸条，其特征在于，包括有不干胶纸（1）、样品垫（2）、结合物垫（3）、硝酸纤维素膜（4）、吸水垫（5）和塑料衬片（6），所述硝酸纤维素膜（4）设置在靠近所述塑料衬片（6）上表面中部位置，所述硝酸纤维素膜（4）的上部左右两侧边缘分别固定有结合物垫（3）和吸水垫（5）；所述结合物垫（3）的左侧端部固定有样品垫（2）；所述样品垫（2）的右侧边缘设置有不干胶纸（1）；所述不干胶纸（1）、样品垫（2）、结合物垫（3）、硝酸纤维素膜（4）以及吸水垫（5）依次相互交错两毫米并粘贴在塑料衬片（6）上；所述硝酸纤维素膜（4）包被有检测T线和质控C线；所述结合物垫（3）为抗原-上转换材料结合物垫；所述检测T线由并排间隔设置的第一检测线T1和第二检测线T2组成，所述第一检测线T1为固定有新型冠状病毒抗体IgM的特异性抗体的分析膜；第二检测线T2为固定有新型冠状病毒抗体IgG的特异性抗体的分析膜；所述质控线C为固定有新冠病毒抗原特异性抗体的分析膜。 2.根据权利要求1所述的一种用于新型冠状病毒检测的稀土上转换荧光纳米试纸条，其特征在于，所述新型冠状病毒为COVID-19型冠状病毒。 3.根据权利要求1所述的一种用于新型冠状病毒检测的稀土上转换荧光纳米试纸条的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一：称取1 mmol的稀土氯化物倒入50mL的三颈烧瓶中，接着取6mL的OA氧化胺溶液置于三颈烧瓶中，在氩气进行保护下，对圆底烧瓶加热至稀土粉末在OA氧化胺溶液中完全溶解时，迅速加入15mL的1-十八烯，接着抽真空以除去稀土氯化物中少量的结晶水至不再暴沸，并继续吹氩气保护，然后缓慢加热到160℃，保温30min，再逐渐冷却到50℃后，逐滴滴加10mL含有2.5 mmol NaOH与4 mmol NH4F的甲醇溶液，50℃下恒温搅拌40min，逐渐升温到100℃抽真空将甲醇除尽；步骤二：在氩气保护下，对所述步骤一取得的反应物再进行快速升温至300℃进行反应90min，待反应结束后，冷却至室温，在6000rpm条件下将最终反应液离心5min，用乙醇洗涤，最后用10mL的环己烷将所得油溶性UCNPS溶解待用；步骤三：对将所述步骤二中合成好的UCNP颗粒做包壳处理，包括称取0.875 mmol的YCl3·6H2O粉末倒入50mL的三颈烧瓶中，接着取6mL的OA氧化胺溶液置于三颈烧瓶中；在氩气进行保护下，对圆底烧瓶加热至稀土粉末在OA氧化胺溶液中完全溶解时，迅速加入15mL的1-十八烯，接着抽真空以除去稀土氯化物中少量的结晶水至不再暴沸，并继续吹氩气保护，然后缓慢加热到160℃，保温30min，再逐渐冷却到50℃后，此时将10mL上述合成的UCNP颗粒与10mL含有2.5 mmol NaOH和4 mmolNH4F的甲醇溶液逐滴交替滴加到三颈烧瓶中50℃下恒温搅拌40min，逐渐升温到100℃抽真空将甲醇除尽；在氩气保护下，快速升温至300℃反应90min；待反应结束后，冷却至室温，在6000rpm条件下将最的终反应液离心5min，用乙醇反复洗涤几次，最后用10mL的氯仿将所得油溶性UCNPS溶解待用；步骤四：转换荧光纳米颗粒的标记，包括准确称取10 mg的高分子聚合物置于25mL的圆底单口烧瓶中，接着加入2mL的无水乙醇和5mL的氯仿，最后加入500μL的上述UCNPS颗粒，超声使其分散均匀，然后将烧瓶接在旋转蒸发仪上，在30℃水浴加热的条件下，进行减压旋转蒸发，直至溶剂蒸干在烧瓶壁上形成一层透亮的膜时再继续旋转蒸发10min，将5mL且 PB(pH=9.0)缓冲溶液加入到烧瓶中，充分超声使瓶壁上的固体分散到缓冲溶液中，于4℃冰箱遮光保存至浓度为1 mg/mL；步骤五：用1.5mL的离心管取500μL的修饰好高分子聚合物的上转换纳米颗粒UCNPS，在16000rpm的条件下离心15min，去掉上清液，再加入1mL的MES(pH=6.0)缓冲溶液，充分超声分散使其在缓冲溶液中分散均匀，然后加入40mL的EDC(1.5 mg/mL)溶液和60mL的NHS(1.5mg/ml)溶液进行活化，反应20min；活化完毕后在16000rpm的条件下离心15min，去掉上清液，再加入990μL的PBS(pH=7.4)缓冲盐溶液，超声分散，将得到的溶液分成两份，其中一份缓慢加入10μL新型冠状病毒抗体IgM对应抗原反应30min，另外一份缓慢加入10μL新型冠状病毒抗体IgG对应抗原反应30min，然后对上述两份溶液分别在16000rpm的条件下离心15min，去掉上清液并加入1mL的PB(pH=7.4)缓冲溶液，超声分散，重复洗涤一次，得到最后的两种抗原标记的UCNP复合物沉淀，加入UCNP保存液进行保存待用；步骤六：检测试纸条的制作与组装，包括试纸条制作，首先将抗原标记的UCNP固定在结合物垫内，然后将新型冠状病毒抗体IgM/新型冠状病毒抗体IgG的特异性抗体分别固定在分析膜上作为检测带，将新冠病毒抗原特异性抗体固定在分析膜上作为质控带；试纸板的组装包括将预包有检测线和质控线的硝酸纤维素膜、结合物垫、样品垫以及吸水垫相互交错两毫米的粘贴在粘性底衬上组装成试纸板；步骤七：试纸条的裁剪，将组装好的试纸板用切条机斩切成宽度为三毫米的试纸条并装入相对应的塑料壳中；步骤八：检测卡的装配，按照不同规格的要求，需要进行检测卡装配的试纸条先把切好的试条装配到完好的PVC卡中，再用压卡机进行压卡；步骤九：将检测卡进行装卡后先密封包装，然后在包装袋打印生产日期并贴上标签，然后入库储存待用。 4.根据权利要求3所述的一种用于新型冠状病毒检测的稀土上转换荧光纳米试纸条的制备方法，其特征在于：所述步骤五中UCNP保存液具体包含有的成分比例为0.5%PVP(w/v)、0.5%D-海藻糖(w/v)、3%蔗糖(w/v)、0.05%Tween-20(v/v)和0.5%BSA(w/v)的PBS磷酸盐缓冲液，所述PBS磷酸盐缓冲液的pH设置为7.4。 5.根据权利要求3所述的一种用于新型冠状病毒检测的稀土上转换荧光纳米试纸条的制备方法，其特征在于：所述步骤一中稀土氯化物的各个稀土离子的摩尔配比为Y（钇离子）：Yb（镱离子）：Er（铒离子）分别对应80%：18%：2%。 6.根据权利要求3所述的一种用于新型冠状病毒检测的稀土上转换荧光纳米试纸条的制备方法，其特征在于：所述步骤六的操作环境为室温且湿度小于40%。 7.根据权利要求3所述的一种用于新型冠状病毒检测的稀土上转换荧光纳米试纸条的制备方法，其特征在于：所述步骤九中装卡操作为将单个卡和无水硅胶干燥剂一起放入铝箔袋中，卡印字方向应朝向铝箔袋开口方向并确保无漏装；所述密封操作为将核实铝箔袋上的效期印字正确后使用封口机进行封口密封。 8.根据权利要求3所述的一种用于新型冠状病毒检测的稀土上转换荧光纳米试纸条的制备方法，其特征在于：所述步骤九中储存的温度设置为2℃～30℃，有效期设置为6个月。
所属类别：	发明专利