详情

原文传递一种与参照分子具有相同或不同的靶蛋白结合的分子的筛选方法

专利名称：	一种与参照分子具有相同或不同的靶蛋白结合的分子的筛选方法
摘要：	本发明公开了一种与参照分子具有相同或不同的靶蛋白结合的分子的筛选方法，所述方法在生物分子相互作用分析系统上进行，包括设置NTA芯片的实验组1、对照组1、实验组2和对照组2，使各组芯片如下结合靶蛋白（A）、参照分子（Ab1）与待测分子（Ab2）：实验组1 A‑Ab1‑Ab2；对照组1 A‑Ab1‑0；实验组2 A‑0‑Ab2；对照组2 A‑0‑0，通过检测结合信号并计算（实验组1‑对照组1）/（实验组2‑对照组2）的比值，来判断待测分子是否与参照分子竞争与靶蛋白的结合。本发明的方法可针对多个参照分子同时进行筛选，且可直接进行杂交瘤细胞培养上清的筛选，具有样品适用性强、灵敏度高、通量高等优点。
专利类型：	发明专利
申请人：	上海普铭生物科技有限公司
发明人：	高攀;王雪;吴建;李祥烽;陶春艳;王骊淳;任红媛
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T21:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
申请号：	CN202010314345.X
公开号：	CN111208307A
代理机构：	北京瑞恒信达知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	张伟
分类号：	G01N33/68;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/68
申请人地址：	201203 上海市浦东新区自由贸易试验区法拉第路86、蔡伦路230号1幢东侧3层
主权项：	1.一种与参照分子具有相同或不同的靶蛋白结合的分子的筛选方法，所述方法在生物分子相互作用分析系统上进行，包括以下步骤： (1)设置实验组1、对照组1、实验组2和对照组2，各组芯片在缓冲液中平衡，然后浸入靶蛋白在缓冲液中的溶液以固化靶蛋白； (2)使实验组1、对照组1的芯片再次在缓冲液中平衡，然后浸入参照分子在缓冲液中的溶液以使靶蛋白结合参照分子至饱和，再次在缓冲液中平衡；之后使实验组1的芯片浸入包含待测分子的样品，同时使对照组1的芯片浸入不包含待测分子的对照溶液；使实验组2、对照组2的芯片再次在缓冲液中平衡，然后使实验组2的芯片浸入所述样品，同时使对照组2的芯片浸入所述对照溶液； (3)检测各实验组和对照组的结合信号，计算（实验组1-对照组1）/（实验组2-对照组2）的比值，比值为60%-100%表明待测分子与参照分子完全不竞争与靶蛋白的结合，比值为30-60%表明待测分子与参照分子部分竞争与靶蛋白的结合，比值为<30%表明待测分子与参照分子完全竞争与靶蛋白的结合。 2.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，所述生物分子相互作用分析系统基于生物膜干涉技术或表面离子共振技术。 3.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，所述生物分子相互作用分析系统为fortebio或biacore生物分子相互作用分析系统。 4.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，所述靶蛋白为抗原。 5.根据权利要求4所述的筛选方法，其特征在于，所述参照分子为一种或多种特异性结合靶蛋白的抗体。 6.根据权利要求4所述的筛选方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述待测分子为抗体。 7.根据权利要求4所述的筛选方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述样品为待测分子在缓冲液中的溶液或包含待测分子的细胞培养液；所述对照溶液为缓冲液或细胞培养基。 8.根据权利要求6所述的筛选方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述样品为待测分子在缓冲液中的溶液或包含待测分子的单克隆杂交瘤细胞培养上清；所述对照溶液为缓冲液或单克隆杂交瘤细胞培养基。 9.根据权利要求1至8中任一项所述的筛选方法，其特征在于，在步骤(1)和步骤(2)中，所述缓冲液为磷酸盐缓冲液 + 0.1% BSA + 0.02%吐温20 + 0.05% Priclin300，pH 7.4。 10.根据权利要求1至8中任一项所述的筛选方法，其特征在于，在步骤(1)和步骤(2)中，所述平衡为将芯片在所述缓冲液中放置60s。 11.根据权利要求1至8中任一项所述的筛选方法，其特征在于，在步骤(1)中，固化靶蛋白至信号高度2nm。 12.根据权利要求1至8中任一项所述的筛选方法，其特征在于，在步骤(2)中，使实验组1的芯片浸入样品300s，并且使对照组1的芯片浸入对照溶液300s。 13.根据权利要求1至8中任一项所述的筛选方法，其特征在于，在步骤(2)中，使实验组2的芯片浸入样品300s，并且使对照组2的芯片浸入对照溶液300s。 14.根据权利要求1至8中任一项所述的筛选方法，其特征在于，所述参照分子为一种或多种特异性结合靶蛋白的抗体，并且每种参照分子在缓冲液中的浓度为66.6-200nM。 15.根据权利要求1至8中任一项所述的筛选方法，其特征在于，所述靶蛋白为人补体C5蛋白，在缓冲液中的浓度为10-100nM。 16.根据权利要求15所述的筛选方法，其特征在于，所述靶蛋白在缓冲液中的浓度为10、12.5、25、50或100nM。 17.根据权利要求16所述的筛选方法，其特征在于，所述靶蛋白在缓冲液中的浓度为50nM。 18.根据权利要求1至8中任一项所述的筛选方法，其特征在于，所述参照分子为以下的一种或多种：抗体1，重链可变区示于SEQ ID NO: 1，轻链可变区示于SEQ ID NO: 2；抗体2，重链可变区示于SEQ ID NO: 3，轻链可变区示于SEQ ID NO: 4；抗体3，重链可变区示于SEQID NO: 5，轻链可变区示于SEQ ID NO: 6；抗体4，重链可变区示于SEQ ID NO: 7，轻链可变区示于SEQ ID NO: 8；并且为人IgG4形式。 19.根据权利要求1至8中任一项所述的筛选方法，其特征在于，所述样品包含一种或多种待测分子，其中每种待测分子在缓冲液中的浓度为25-200nM；或者，所述样品为稀释或未稀释的单克隆杂交瘤细胞培养上清。 20.根据权利要求19所述的筛选方法，其特征在于，每种待测分子在缓冲液中的浓度为200nM、100nM、50nM或25nM。 21.根据权利要求20所述的筛选方法，其特征在于，每种待测分子在缓冲液中的浓度为200nM。 22.根据权利要求1至8中任一项所述的筛选方法，其特征在于，所述方法还包括：设置一组自反应实验，将实验组1和实验组2里待测分子的结合过程均替换为参照分子，所测得的数据比值<30%证明所述方法的数据可信。
所属类别：	发明专利