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原文传递一种用于宫颈癌筛查的液基细胞检测试剂盒及使用方法

专利名称：	一种用于宫颈癌筛查的液基细胞检测试剂盒及使用方法
摘要：	本发明公开了一种用于宫颈癌筛查的液基细胞检测试剂盒及使用方法，其技术方案要点包括液基细胞清洗液和细胞染色液，液基细胞清洗液包括细胞保存液和蔗糖；细胞保存液包括以下：多聚甲醛、磷酸盐缓冲液、抗坏血酸、EDTA‑Na2·2H2O、N‑乙酰‑L‑半胱氨酸、4M NaOH、吐温‑20和无菌水；细胞染色液包括苏木素和EA50染色液，苏木素包括以下：硫酸铝钾、苏木色精、碘酸钠、乙酸、无水乙醇、丙三醇和无菌水；EA50染色液包括以下：亮绿SF、曙红、甲醇、磷钨酸、碳酸锂、冰醋酸和无菌水。具有保存细胞稳定性高、细胞固定良好、保留完整细胞形态、防止粘液干扰、细胞聚集、有效裂解红细胞等优点；价格便宜，方便易得，液基细胞保存液成本较低，便于推广应用。
专利类型：	发明专利
申请人：	浙江殷欣生物技术有限公司
发明人：	张佩;章喜超;曾杰
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T17:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T17:00:00+0805
申请号：	CN201911303105.3
公开号：	CN111024471A
代理机构：	杭州赛科专利代理事务所(普通合伙)
代理人：	冯年群
分类号：	G01N1/30;G;G01;G01N;G01N1;G01N1/30
申请人地址：	311199 浙江省杭州市余杭经济技术开发区新颜路22号501D-1
主权项：	1.一种用于宫颈癌筛查的液基细胞检测试剂盒,其特征在于，包括液基细胞清洗液和细胞染色液，所述液基细胞清洗液包括细胞保存液和蔗糖；所述细胞保存液由以下成分组合：多聚甲醛、磷酸盐缓冲液、抗坏血酸、EDTA-Na2·2H2O、N-乙酰-L-半胱氨酸、4M NaOH、吐温-20和无菌水；所述细胞染色液包括苏木素和EA50染色液，所述苏木素由以下成分组成：硫酸铝钾、苏木色精、碘酸钠、乙酸、无水乙醇、丙三醇和无菌水；所述EA50染色液由以下成分组成：亮绿SF、曙红、甲醇、磷钨酸、碳酸锂、冰醋酸和无菌水。 2.根据权利1所述的一种用于宫颈癌筛查的液基细胞检测试剂盒,其特征在于，1L的所述细胞保存液中按质量百分比的成分：多聚甲醛0.6%-1.1% 抗坏血酸0.03%-0.12% EDTA-Na2·2H2O 0.08%-0.17% N-乙酰-L-半胱氨酸0.01%-0.12%； 1L的所述细胞保存液中按体积百分比的成分：吐温-20 0.005%-0.07% 4M NaOH 0.05%-0.13%。 3.根据权利1所述的一种用于宫颈癌筛查的液基细胞检测试剂盒,其特征在于，1L的所述液基细胞清洗液中细胞保存液的体积百分比为：8.5%-16%；1L的所述液基细胞清洗液中蔗糖的质量百分比为： 8%-13%。 4.根据权利1所述的一种用于宫颈癌筛查的液基细胞检测试剂盒,其特征在于，1L的所述细胞染色液的苏木素中按质量百分比的成分：硫酸铝钾3%-7% 苏木色精0.1%-1.2% 碘酸钠0.01%-0.7%； 1L的所述细胞染色液的苏木素中按体积百分比的成分：乙酸1.5%-2.3% 无水乙醇6.5%-10% 丙三醇0.2%-0.8%。 5.根据权利1所述的一种用于宫颈癌筛查的液基细胞检测试剂盒,其特征在于，1L的所述细胞染色液中的EA50染色液中按质量百分比的成分：亮绿SF 0.01%-0.7% 曙红0.2%-0.8% 磷钨酸0.15%-0.3%； 1L的所述细胞染色液中的EA50染色液中按体积百分比的成分：甲醇20%-29% 碳酸锂0.9%-2% 冰醋酸1.5%-2.3%。 6.根据权利1所述的一种用于宫颈癌筛查的液基细胞检测试剂盒,其特征在于，所述磷酸盐缓冲液由磷酸盐和水性介质组成，1L的所述细胞保存液中磷酸盐的质量百分比为：0.09%-0.25%。 7.一种根据权利要求1-6任意一项所述试剂盒的使用方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤（1）：将采得的样本轻轻混匀，不需要振荡；步骤（2）：在10ml离心管上标记编号；步骤（3）：将每个样本平分成三份在10ml离心管里；步骤（4）：1000r/min离心5分钟,弃上清；步骤（5）：分别在3个离心管里加入保存液，用吸管轻轻吹打混匀；步骤(6)：在一次性涂片器用铅笔写上编号，加入清洗液，样本摇匀后，600r/min 离心3min ，从涂片器中取出玻片置于染色架；步骤(7)：将装有玻片的染色架在95%乙醇中固定10min以上；步骤(8)：进行染色；步骤(9)：滴加中性树脂，封片；步骤(10)：镜检。 8.根据权利要求7所述试剂盒的使用方法，其特征在于，所述步骤（8）中进行染色的具体步骤为：苏木素染色3min；在清水中洗去苏木素，盐酸酒精分化，清水洗去盐酸酒精，流水反蓝；过3道95%乙醇脱水；置于EA50中染色3min；清水漂洗；过3道无水乙醇脱水； ⑦过两道TO透化。 9.根据权利要求7所述试剂盒的使用方法，其特征在于：所述步骤（2）中的标记编号为实验组和对照组。 10.根据权利要求9所述试剂盒的使用方法，其特征在于：所述步骤（3）中每组离心管设为3个。
所属类别：	发明专利