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原文传递用于肝细胞癌筛查的核酸电化学检测体系及检测方法

专利名称：	用于肝细胞癌筛查的核酸电化学检测体系及检测方法
摘要：	本发明公开了一种用于肝细胞癌筛查的核酸电化学检测体系及检测方法。该方法依赖于催化发夹环组装过程实现对于目标miRNA‑500的特异性识别和信号放大，进而借助点击化学技术促发电化学信号报告分子从溶液到电极界面的转移，实现对于miRNA‑500的电化学检测。本发明检测miRNA‑500的线性范围是5~10000 pM，检出限是3.4 pM。另外，该发明具有灵敏度高、特异性强、操作简单等优点，因此在肝细胞癌筛查领域中具有巨大的潜在应用价值。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	上海;31
申请人：	上海大学
发明人：	曹亚;朱小立;王美文;张娟;赵婧;陈桂芳
专利状态：	有效
申请日期：	2018-06-01T00:00:00+0800
发布日期：	2019-04-26T00:00:00+0800
申请号：	CN201810554314.4
公开号：	CN109682875A
代理机构：	上海上大专利事务所(普通合伙)
代理人：	顾勇华
分类号：	G01N27/327(2006.01);G;G01;G01N;G01N27
申请人地址：	200444 上海市宝山区上大路99号
主权项：	1.一种用于肝细胞癌筛查的核酸电化学检测体系，为三电极传感体系，其中对电极是铂电极，参比电极是饱和甘汞电极，工作电极为金电极，其特征在于所述的金电极上修饰有二苯基环辛炔；电解液为含三羟甲基氨基甲烷、单链DNA探针H1和H2的pH值为7.4~7.8的盐酸缓冲液，其中三羟甲基氨基甲烷的浓度为：10~20 mM；单链DNA探针H1的浓度为：25~50nM；单链DNA探针H2的浓度为：25~50 nM；所述的单链DNA探针H1的碱基序列为5'-GGGTTGGGATTCTCACCCAGGTAGGAAGGATTACATCCCAACCCATA-azido-3'；所述的单链DNA探针H2的碱基序列为5'-MB-TATGGGTTGGGATGTAATCCTTGCTAATCCCAAC-3'。 2.一种制备根据权利要求1所述的用于肝细胞癌筛查的核酸电化学检测体系的方法，其特征在于该方法的具体步骤为： a.金电极的制备方法： a-1. 将预处理的金电极置于0.5~1 mM的巯基丙酸溶液中反应16~18小时，随后用超纯水冲洗干净； a-2．将步骤a-1所得金电极用0.5~1 mM的巯基己醇溶液以及0.3~0.5 M 的N-(3-二甲氨基丙基)-N'-乙基碳二亚胺（EDC）和0.08~0.12 M 的N-羟基丁二酰亚胺（NHS）混合溶液对金电极依次进行封闭处理1~1.5小时和活化处理20~40分钟；再次使用超纯水冲洗后， a-3. 将步骤a-2所得金电极浸泡在0.8~1.2 mM的氨基化二苯基环辛炔的溶液中处理20~40分钟；最后使用超纯水冲洗金电极并用氮气吹干； b.电解液的配制：分别取250 μL浓度为0.5~1 μM的单链DNA探针H1和H2的储备液按1:1的摩尔比置于微量管中，混合均匀；随后，向混合液中进一步加入4.4 mL含有10~20 mM三羟甲基氨基甲烷的pH值为7.4~7.8的盐酸缓冲液，混合均匀。 3.一种肝细胞癌的检测方法，采用根据权利要求1用于肝细胞癌筛查的核酸电化学检测体系进行检测，其特征在于该方法的具体步骤为： a.将待检测液与电解液按1:49的体积比混合，反应时间为1~2小时，反应温度为30~40ºC； b.将金电极浸入步骤（a）所得的混合溶液中在30~40 ºC条件下反应10~20分钟，实现对修饰有叠氮基团的DNA探针的捕获； c.CHI660c电化学工作站记录起始电位-0.6 V和终止电位0.1 V范围内的方波伏安图谱，并根据所测得的方波伏安响应峰电流的强度实现对miRNA-500的检测。
所属类别：	发明专利