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原文传递基于双层多孔膜的荧光竞争法免疫检测方法、装置及应用

专利名称：	基于双层多孔膜的荧光竞争法免疫检测方法、装置及应用
摘要：	本发明涉及基于双层多孔膜的荧光竞争法免疫检测方法、装置及应用，基于待测抗原Ag配置过量的荧光标记的特异性抗体Ab+，混合后获得混合溶液A，以第一多孔膜层分离大细胞和/或大蛋白得到混合溶液B，将混合溶液B以设置竞争性抗原Ag’的第二多孔膜层分离，竞争性抗原Ag’结合过量的抗体Ab+，检测荧光强度，获得待测抗原的浓度。本发明利用高分子多孔膜的不同分离尺寸，对免疫层析过程不同颗粒进行分离，通过检测荧光强度，获取被标记的待测物抗原的浓度信息；通过不同孔径控制反应物的分离，原理简单，配合可分离的多层试剂管，操作简单，结果准确度高，不需大型设备且可以同时完成多组检测，自动化或人工操作均可。
专利类型：	发明专利
申请人：	苏州和迈精密仪器有限公司
发明人：	龚培超;蒋凯;张涛
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T20:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T14:00:00+0805
申请号：	CN201911327373.9
公开号：	CN111007241A
代理机构：	杭州赛科专利代理事务所(普通合伙)
代理人：	郭薇
分类号：	G01N33/541;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/541
申请人地址：	215002 江苏省苏州市高新区科技城锦峰路8号5号楼401室
主权项：	1.一种基于双层多孔膜的荧光竞争法免疫检测方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：步骤1：获取检测样本，所述检测样本中含有待测抗原Ag；步骤2：基于待测抗原，配置过量的进行荧光标记的特异性抗体Ab+；将检测样本和抗体Ab+混合并充分反应，获得混合溶液A；步骤3：将混合溶液A以第一多孔膜层分离，第一多孔膜层分离直径大于预设直径的大细胞和/或大蛋白，得到混合溶液B；步骤4：在第二多孔膜层上设置抗原Ag的竞争性抗原Ag’；步骤5：将混合溶液B以第二多孔膜层分离，检测荧光强度，获得检测样本中待测抗原的浓度。 2.根据权利要求1所述的一种基于双层多孔膜的荧光竞争法免疫检测方法，其特征在于：所述混合溶液B包括检测样本和抗体Ab+混合后得到的Ag-Ab+和过量的抗体Ab+。 3.根据权利要求1所述的一种基于双层多孔膜的荧光竞争法免疫检测方法，其特征在于：所述竞争性抗原Ag’固定于第二多孔膜层上。 4.根据权利要求3所述的一种基于双层多孔膜的荧光竞争法免疫检测方法，其特征在于：步骤4中，第二多孔膜层的膜孔直径大于抗原Ag和特异性抗体Ab+结合后的结合物的直径。 5.根据权利要求4所述的一种基于双层多孔膜的荧光竞争法免疫检测方法，其特征在于：步骤5包括以下步骤：步骤5.1：将混合溶液B以第二多孔膜层分离，第二多孔膜层将混合溶液B分离为Ag-Ab+和Ag’-Ab+；步骤5.2：检测分离到Ag-Ab+的混合物的荧光强度，获得Ag-Ab+的浓度；步骤5.3：基于步骤5.2的结果，获得检测样本中待测抗原的浓度。 6.根据权利要求1所述的一种基于双层多孔膜的荧光竞争法免疫检测方法，其特征在于：所述竞争性抗原Ag’与抗原Ag同源。 7.根据权利要求1所述的一种基于双层多孔膜的荧光竞争法免疫检测方法，其特征在于：所述第一多孔膜层的膜孔直径小于5μm。 8.一种采用权利要求1~7之一所述的基于双层多孔膜的荧光竞争法免疫检测方法的检测装置，其特征在于：所述检测装置包括自上而下可拆卸设置的第一分离腔、第二分离腔和第三分离腔；所述第一分离腔包括第一腔壁及设于第一腔壁底部的第一多孔膜层，所述第一腔壁顶部可拆卸设有盖体；所述第二分离腔包括第二腔壁及设于第二腔壁底部的第二多孔膜层，所述第二腔壁的顶部通过第一多孔膜层与第一分离腔空间连通，所述第二多孔膜层上设有竞争性抗原Ag’；所述第三分离腔的顶部通过第二多孔膜层与第二分离腔空间连通。 9.一种采用权利要求1~7之一所述的基于双层多孔膜的荧光竞争法免疫检测方法的应用，其特征在于：所述基于双层多孔膜的荧光竞争法免疫检测方法应用于针对小分子抗原的荧光竞争法免疫检测。 10.根据权利要求9所述的基于双层多孔膜的荧光竞争法免疫检测方法的应用，其特征在于：所述小分子抗原的直径为20-100纳米。
所属类别：	发明专利