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原文传递基于多层高分子多孔膜的荧光免疫检测方法、装置及应用

专利名称：	基于多层高分子多孔膜的荧光免疫检测方法、装置及应用
摘要：	本发明涉及基于多层高分子多孔膜的荧光免疫检测方法、装置及应用，配置过量未标记特异性抗体Ab和荧光标记的特异性抗体Ab+，与含待测抗原Ag的检测样本混合获得混合溶液A，倒入第一分离腔、以第一多孔膜层分离得到混合溶液B，导入第二分离腔、以第二多孔膜层分离后检测膜上荧光强度，获得检测样本中待测抗原的浓度；应用于针对大分子量蛋白的双抗体夹心荧光免疫法检测。本发明利用高分子多孔膜的不同分离尺寸，分离不同颗粒，获取被标记待测物抗原，检测荧光强度获得待测物的浓度信息；通过不同孔径控制反应物的分离，原理简单，配合可分离的多层试剂管，操作简单，结果准确度高，不需大型设备且可以自动化或人工同时完成多组检测。
专利类型：	发明专利
申请人：	苏州和迈精密仪器有限公司
发明人：	龚培超;蒋凯;张涛
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T20:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T14:00:00+0805
申请号：	CN201911327378.1
公开号：	CN111007242A
代理机构：	杭州赛科专利代理事务所(普通合伙)
代理人：	郭薇
分类号：	G01N33/541;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/541
申请人地址：	215002 江苏省苏州市高新区科技城锦峰路8号5号楼401室
主权项：	1.一种基于多层高分子多孔膜的荧光免疫检测方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：步骤1：获取检测样本，所述检测样本中含有待测抗原Ag；步骤2：基于待测抗原，配置过量未标记特异性抗体Ab和进行荧光标记的特异性抗体Ab+；将检测样本和抗体Ab、抗体Ab+混合并充分反应，获得混合溶液A；步骤3：将混合溶液A以第一多孔膜层分离，第一多孔膜层分离直径大于预设直径的大细胞和/或大蛋白，得到混合溶液B；步骤4：将混合溶液B以第二多孔膜层分离，检测荧光强度，获得检测样本中待测抗原的浓度。 2.根据权利要求1所述的一种基于多层高分子多孔膜的荧光免疫检测方法，其特征在于：所述混合溶液B包括检测样本和抗体Ab、抗体Ab+混合并充分反应后得到的双抗夹心蛋白Ab+-Ag-Ab、过量的抗体Ab、过量的抗体Ab+。 3.根据权利要求1所述的一种基于多层高分子多孔膜的荧光免疫检测方法，其特征在于：所述抗体Ab的直径大于抗体Ab+的直径。 4.根据权利要求3所述的一种基于多层高分子多孔膜的荧光免疫检测方法，其特征在于：所述抗体Ab的直径大于等于200nm。 5.根据权利要求3所述的一种基于多层高分子多孔膜的荧光免疫检测方法，其特征在于：步骤4中，第二多孔膜层的膜孔直径小于抗体Ab的直径且大于抗体Ab+的直径。 6.根据权利要求5所述的一种基于多层高分子多孔膜的荧光免疫检测方法，其特征在于：所述步骤4包括以下步骤：步骤4.1：将混合溶液B以第二多孔膜层分离，第二多孔膜层将混合溶液B分离为膜上的双抗夹心蛋白Ab+-Ag-Ab和过量的抗体Ab、膜下的过量的抗体Ab+；步骤4.2：检测第二多孔膜层上的混合物的荧光强度，获得双抗夹心蛋白Ab+-Ag-Ab的浓度；步骤4.3：基于步骤4.2的结果，获得检测样本中待测抗原的浓度。 7.根据权利要求1所述的一种基于多层高分子多孔膜的荧光免疫检测方法，其特征在于：所述第一多孔膜层的膜孔直径小于5μm。 8.一种采用权利要求1~7之一所述的基于多层高分子多孔膜的荧光免疫检测方法的检测装置，其特征在于：所述检测装置包括自上而下可拆卸设置的第一分离腔、第二分离腔和第三分离腔；所述第一分离腔包括第一腔壁及设于第一腔壁底部的第一多孔膜层，所述第一腔壁顶部可拆卸设有盖体；所述第二分离腔包括第二腔壁及设于第二腔壁底部的第二多孔膜层，所述第二腔壁的顶部通过第一多孔膜层与第一分离腔空间连通；所述第三分离腔的顶部通过第二多孔膜层与第二分离腔空间连通。 9.一种采用权利要求1~7之一所述的基于多层高分子多孔膜的荧光免疫检测方法的应用，其特征在于：所述基于多层高分子多孔膜的荧光免疫检测方法应用于针对大分子量蛋白的双抗体夹心荧光免疫法检测。 10.根据权利要求9所述的基于多层高分子多孔膜的荧光免疫检测方法的应用，其特征在于：所述大分子量蛋白包括至少两个结合位点。
所属类别：	发明专利