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原文传递一种全血的免疫发光分析用稀释液及其分析方法

专利名称：	一种全血的免疫发光分析用稀释液及其分析方法
摘要：	本发明公开了一种全血的免疫发光分析用稀释液，所述稀释液中各组分的质量浓度为：PBS 5～20mmol/L、BSA 0.1％～1％、PC‑300 0.01％～0.1％、分散剂0.01％～0.5％。通过取全血的免疫发光分析用稀释液、校准品、偶联有PCT抗体的磁微粒混悬液依次加入反应管中，振荡混匀，37℃孵育10～30min，分离，清洗，将洗涤后的反应容器继续加入吖啶酯标记物继续孵育12min，分离，清洗，在全自动发光仪中进行测试可进行全血的免疫发光分析。本发明的有益效果为：加入样本稀释液，并在样本稀释液中加入分散剂，分散剂可使抗原和抗体充分反应，其发光值较不加分散剂有了很大的提高且CV变化不大。
专利类型：	发明专利
申请人：	北京指真生物科技有限公司
发明人：	马永波;李根;徐兵;杨宝君;刘燕;刘希凯
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T20:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T21:00:00+0805
申请号：	CN201911327522.1
公开号：	CN111044718A
代理机构：	北京慕达星云知识产权代理事务所(特殊普通合伙)
代理人：	崔自京
分类号：	G01N33/531;G01N33/74;G01N33/577;G01N33/543;G01N21/76;G;G01;G01N;G01N33;G01N21;G01N33/531;G01N33/74;G01N33/577;G01N33/543;G01N21/76
申请人地址：	101111 北京市大兴区北京经济技术开发区科创十四街20号院1号楼三层302
主权项：	1.一种全血的免疫发光分析用稀释液，其特征在于，所述稀释液中各组分的质量浓度为：PBS 5～20mmol/L、BSA 0.1％～1％、PC-3000.01％～0.1％、分散剂0.01％～0.5％。 2.根据权利要求1所述的一种全血的免疫发光分析用稀释液，其特征在于，所述分散剂为N-十二烷基-N，N-二甲基氨基丙磺酸盐、十烷基二甲基氧化铵、十六烷基醚羟丙基羧酸甜菜碱、十六烷基聚氧乙烯醚羟丙基羧酸甜菜碱中的一种或多种。 3.一种以权利要求1所述全血的免疫发光分析用稀释液进行全血的免疫发光分析方法，其特征在于，步骤如下： (1)偶联有PCT抗体的磁微粒混悬液的制备 (11)取羧基磁微粒于硅化离心管中，加入200～500μL pH值为5.0～6.5、浓度为0.05～0.2mol/L的MES缓冲液，涡旋混匀，置于磁力架上，静置5min使所述羧基磁微粒与所述MES缓冲液分离，弃去上清，重复上述步骤3次后加入200～500μL pH值为5.0～6.5、浓度为0.05～0.2mol/L的MES缓冲液重悬羧基磁微粒； (12)再加入20～200μL4℃的浓度为10～200mg/mL的EDC偶联试剂，于旋转反应器上涡旋，室温孵育15～40min； (13)孵育后去除上清液，用0.1M MES缓冲液清洗1次； (14)清洗后加入150μL MES缓冲液重悬羧基磁微粒，加入10～100μg降钙素原PCT抗体，混匀，室温反应2～4h； (15)之后加入0.1～5mL封闭缓冲液进行封闭，时间为1～5h； (16)封闭后去上清，加入600μL清洗缓冲液洗涤3次，得到偶联有PCT抗体的磁微粒混悬液，置于1.5mL浓度为2mg/mL的保存液中，2～8℃保存备用；所述保存液为10mMPBS、1％BSA、0.5％Tween-20、0.05％PC-300的混合液； (2)吖啶酯标记的PCT单克隆抗体的制备 (21)在离心管中加入120μL浓度为0.05～0.5M、pH值为8.0～10.0的Na2CO3-NaHCO3标记缓冲液，再加入0.2mg的PCT单克隆抗体，混匀； (22)之后加入5μL6.5 mmol/L的NSP-SA-NHSDMF溶液，避光反应至吖啶酯与PCT单克隆抗体的摩尔比为5～25:1，震荡混匀，室温下反应1～4h； (23)再加入10～100μL质量浓度为10％的赖氨酸，反应10～40min； (24)将标记物NSP-SA-NHS-Ab与游离NSP-SA-NHS通过Sephadex G-25柱分离，用0.1mol/L pH值为6.3的PBS纯化缓冲液平衡并淋洗层析柱进行层析，过程中用紫外分光光度计检测产物200～800nm的光谱，分离得到吖啶酯标记的PCT单克隆抗体，之后加入质量分数1％的BSA和质量分数0.05％的防腐剂，分装冰冻保存备用； (3)PCT校准品的制备用含有20％全血的校准品缓冲液将降钙素原PCT纯品稀释成浓度为0、0.02、0.2、2、20、100ng/mL的校准品，所述校准品缓冲液为含1％BSA的10mM PBS，pH为7.4； (4)检测取全血的免疫发光分析用稀释液40μL、校准品100μL、偶联有PCT抗体的磁微粒混悬液50μL依次加入反应管中，振荡混匀，37℃孵育10～30min，分离，清洗，将洗涤后的反应容器继续加入10μL吖啶酯标记的PCT单克隆抗体继续孵育12min，分离，清洗，在全自动发光仪中进行测试。 4.如权利要求3所述的一种全血的免疫发光分析方法，其特征在于，所述封闭缓冲液为：浓度为50mM含1％(W/W)BSA的Tris缓冲液，pH值为7.2。 5.如权利要求3所述的一种全血的免疫发光分析方法，其特征在于，步骤(16)中所述清洗缓冲液为pH7.0、浓度为5mmol/l的PBS缓冲液。
所属类别：	发明专利