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原文传递人血浆中同时测定伊马替尼及伊马替尼代谢物浓度的方法

专利名称：	人血浆中同时测定伊马替尼及伊马替尼代谢物浓度的方法
摘要：	本发明公开了一种人血浆中同时测定伊马替尼及伊马替尼代谢物浓度的方法，一、标准溶液的标定(a)标准工作液的配制：伊马替尼标准工作液的配制；去甲伊马替尼标准工作液的配制；(b)用标准溶液的标定，得到标准曲线方程：伊马替尼标准曲线方程；去甲伊马替尼标准曲线方程；二、(c)检测血液的离心处理；三、(d)待测样品的有机处理；四、(e)待测样品的检测。采用二维液相色谱法同时监测人血浆中伊马替尼及伊马替尼代谢物浓度，具有可操作性强、快速、灵敏、具有良好重现性、且监测成本较低的优点。
专利类型：	发明专利
申请人：	四川省肿瘤医院
发明人：	陈燕;肖洪涛;周瑜;王秋菊;马洪丽
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T23:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T08:00:00+0805
申请号：	CN201911337424.6
公开号：	CN111122727A
代理机构：	成都环泰专利代理事务所(特殊普通合伙)
代理人：	李斌;李辉
分类号：	G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/54;G01N30/60;G;G01;G01N;G01N30;G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/54;G01N30/60
申请人地址：	610000 四川省成都市武侯区人民南路4段55号
主权项：	1.一种人血浆中同时测定伊马替尼及伊马替尼代谢物浓度的方法，其特征在于：一、标准溶液的标定 (a)标准工作液的配制：伊马替尼标准工作液的配制：精确称取伊马替尼标准品5mg置于5mL容量瓶，用50％甲醇的水溶液溶解并定容于5mL,得到标准储备液A，将标准储备液A用50％的甲醇进行稀释，分别在含有130-14000ng/mL伊马替尼的浓度范围内配制出六种标准工作液，并在-20℃条件下保存；伊马替尼代谢物(去甲伊马替尼)标准工作液的配制：精确称取去甲伊马替尼标准品5mg置于5mL容量瓶，用50％甲醇的水溶液溶解并定容于5mL,得到标准储备液B，将标准储备液B用50％的甲醇进行稀释，分别在含有130-14000ng/mL去甲伊马替尼的浓度范围内配制出六种标准工作液，并在-20℃条件下保存； (b)用标准溶液的标定，得到标准曲线方程：伊马替尼标准曲线方程：用移液枪分别移取上述配制的若干种不同浓度的伊马替尼标准工作液100μL，加入900μL空白血浆混合制成若干种不同浓度的标准曲线血浆样品；分别取1000μL有机处理剂于若干个2mL无菌Ep管中，分别加入400μL上述不同浓度的标准曲线血浆样品，涡旋仪涡旋60s后，高速离心(145000rpm，8min)，分别用移液枪取上清液至进样瓶中，使用二维液相色谱仪对上述上清液进行检测，得到若干种不同浓度的伊马替尼标准溶液色谱图，以上述若干个伊马替尼标准溶液浓度为横坐标X，若干个不同浓度的伊马替尼标准溶液峰面积为纵坐标Y进行线性回归拟合，拟合得到相应的标准曲线方程y＝ax+b，并且得出权重系数a和b；去甲伊马替尼标准曲线方程：用移液枪分别移取上述配制的若干种不同浓度的标准工作液100μL，加入900μL空白血浆混合制成若干种不同浓度的去甲伊马替尼标准曲线血浆样品；分别取1000μL有机处理剂于若干个2mL无菌Ep管中，分别加入400μL上述不同浓度的标准曲线血浆样品，涡旋仪涡旋60s后，高速离心(145000rpm，8min)，分别用移液枪取上清液至进样瓶中，使用二维液相色谱仪对上述上清液进行检测，得到若干种不同浓度的去甲伊马替尼标准溶液色谱图，以上述若干个去甲伊马替尼标准溶液浓度为横坐标X，若干个不同浓度的去甲伊马替尼标准溶液峰面积为纵坐标Y进行线性回归，拟合得到相应的标准曲线方程y＝cx+d，并且得出权重系数c和d；二、待测血液样品的分离处理： (c)取待检测血液样品至少5mL，进行离心(5000rpm，6-10min),取上清液，将上清液置于-20℃的条件下进行保存；三、待测血液样品的有机处理： (d)取1000μL有机处理剂于2mL无菌Ep管中，加入400μL步骤(二)中所述血液上清液，涡旋仪涡旋60s后，高速离心(145000rpm，6-10min)，用移液枪取上清液至进样瓶中，待进样分析；四、待测血液样品的定量检测： (e)采用已建立的二维液相色谱法，对上述步骤待测样品进行检测，得到待测样品伊马替尼及其代谢物的色谱图，从上述色谱图中得到伊马替尼与去甲伊马替尼的峰面积及浓度。 2.根据权利要求1所述的人血浆中同时测定伊马替尼及伊马替尼代谢物浓度的方法，其特征在于：在步骤(a)中所述伊马替尼标准工作液为六种。六种伊马替尼标准工作液的浓度分别为：13.44ng/mL、44.80ng/mL、112.00ng/mL、280.00ng/mL、700.00ng/mL和1400.00ng/mL。 3.根据权利要求1所述的人血浆中同时测定伊马替尼及伊马替尼代谢物浓度的方法，其特征在于：在步骤(a)中所述去甲伊马替尼标准工作液为六种。六种去甲伊马替尼标准工作液的浓度分别为：13.44ng/mL、44.80ng/mL、112.00ng/mL、280.00ng/mL、700.00ng/mL和1400.00ng/mL。 4.根据权利要求1所述的检测血液中伊马替尼及其代谢物血药浓度的二维液相色谱法，其特征在于，在步骤(a)中，标准储备液A和标准储备液B是用含有50％甲醇水溶液进行稀释的。 5.根据权利要求1所述的检测血液中伊马替尼及其代谢物血药浓度的二维液相色谱法，其特征在于，步骤(d)所述的人血浆中同时测定伊马替尼及伊马替尼代谢物浓度的方法，其特征在于：所述有机处理剂为甲醇-乙腈。 6.根据权利要求1所述的人血浆中同时测定伊马替尼及伊马替尼代谢物浓度的方法，其特征在于，步骤(e)中的二维液相色谱法所使用的一维萃取柱(LC1 Column)为Aston SX1(3.525mm,5μm)；中间柱为Aston SCB(4.610mm,3.5μm)；二维分析柱(LC2 Column)为Aston SCB(4.6*125mm,5μm)。 7.根据权利要求6所述的人血浆中同时测定伊马替尼及伊马替尼代谢物浓度的方法，其特征在于，将步骤(e)中的二维液相色谱法的一维萃取柱的柱温、中间柱的柱温和二维分析柱的柱温均设置为40℃。 8.根据权利要求6所述的人血浆中同时测定伊马替尼及伊马替尼代谢物浓度的方法，其特征在于，步骤(e)中的二维液相色谱法所使用的一维色谱柱流动相为含有甲醇、乙腈和水的溶液，其中，甲醇：乙腈：水＝(5-20):(15-25):(55-80)，然后以磷酸水溶液调节pH至3.0-3.5，并加入1％的柠檬酸铵；中间柱流动相为纯水；二维色谱柱流动相为含有甲醇、乙腈和水的溶液，其中，甲醇:乙腈:水＝(30-45):(35-65):(5-20)，然后以磷酸水溶液调节pH至3.0-3.5，并加入1％的柠檬酸铵；其中流动相流速为1mL/min，进样量为500μL。 9.根据权利要求8所述的人血浆中同时测定伊马替尼及伊马替尼代谢物浓度的方法，其特征在于，所述甲醇、乙腈和水之间的比值为体积之比。 10.根据权利要求1所述的人血浆中同时测定伊马替尼及伊马替尼代谢物浓度的方法，其特征在于，步骤(e)中的二维液相色谱法中所使用的紫外检测器的波长为264nm。
所属类别：	发明专利