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原文传递一种尿液中腺苷含量的检测方法及其应用

专利名称：	一种尿液中腺苷含量的检测方法及其应用
摘要：	本发明属于生物医药领域，具体的是一种尿液中腺苷含量的检测方法及其应用。本发明中尿液中腺苷含量的检测方法包括样本收集、原始指纹图谱获取、原始数据获取和腺苷含量的判断等步骤。本发明的有益效果在于：通过收集尿液样本，检测尿液中腺苷含量，盆腔器官脱垂的诊断提供参考，提高处理速度，从而加快诊断速度；尿液中腺苷含量的检测方法，以尿液作为样本进行检测，取样简单，取样过程短，能够显著缩短样本的处理时间，提高处理效率。
专利类型：	发明专利
申请人：	江西省肿瘤医院(江西省癌症中心)
发明人：	饶军;邓薇;朱晓雷;邱国民
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T21:00:00+0805
申请号：	CN201911375866.X
公开号：	CN111044632A
代理机构：	宿迁市永泰睿博知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	刘慧
分类号：	G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/36;G01N30/72;G01N30/86;G;G01;G01N;G01N30;G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/36;G01N30/72;G01N30/86
申请人地址：	330029 江西省南昌市北京东路519号
主权项：	1.一种尿液中腺苷含量的检测方法，其特征在于，包括以下步骤： S1、样本收集：收集待测人群的尿液，作为分析样本； S2、原始指纹图谱获取：将每个分析样本采用UHPLC-Q-TOF-MS代谢组学技术进行分析，得到正常人和盆腔器官脱垂患者的尿液样本的原始代谢指纹图谱； S3、原始数据获取：通过非靶向代谢组学分析方法比较正常人和盆腔器官脱垂患者的尿液样本的原始代谢指纹图谱，借助有监督模式识别的偏最小二乘判别分析法(PLS-DA)结合独立样本T检验筛选分析样本中的代谢物的原始数据； S4、腺苷含量的判断：原始数据经ProteoWizard转换成.mzXML格式，然后采用XCMS程序进行峰对齐、保留时间校正和提取峰面积，再对代谢物进行鉴定，然后根据代谢物中腺苷的峰面积除以总的峰面积得到其百分比含量。 2.根据权利要求1所述的尿液中腺苷含量的检测方法，其特征在于，所述非靶向代谢组学分析方法包括以下步骤： (1)、色谱检测：将分析样本采用Agilent 1290Infinity LC超高效液相色谱系统：色谱柱采用HILIC色谱；柱温25℃；流速0.3mL/min；进样量2μL；流动相A：水+25mmol/L的乙酸铵+25mmol/L的氨水，B：乙腈；梯度洗脱程序如下：0-0.5min，95％B；0.5-7min，B从95％线性变化至65％；7-8min，B从65％线性变化至40％；8-9min，B维持在40％；9-9.1min，B从40％线性变化至95％；9.1-12min，B维持在95％；整个分析过程中样品置于4℃自动进样器中； (2)分别采用电喷雾电离正离子和负离子模式进行检测：样本经Agilent1290InfinityLC超高效液相色谱系统分离后用TripleTOF5600质谱仪进行质谱分析，ESI源条件如下： Ion Source Gas1：60； Ion Source Gas2：60； Curtain gas：30；源温度：600℃； IonSapary Voltage Floating(ISVF)±5500V； TOFMS scan m/z range：60-1000Da； Production scan m/z range：25-1000Da； TOF MS scan accumulation time：0.20s/spectra； Production scan accumulation time：0.05s/spectra；二级质谱采用information dependent acquisition获得，并且采用highsensitivity模式，Declustering potential：±60V，Collision Energy：35±15eV，IDA设置如下：Exclude isotopes within 4Da，Candidate ions to monitorper cycle：6。 3.根据权利要求2所述的尿液中腺苷含量的检测方法，其特征在于，所述步骤“S1”还包括对尿液的预处理，具体包括以下步骤： 1)、取晨尿，在温度为4℃的条件下离心10min，离心速度为3500r/min，提取上清液，-80℃保存，形成尿液样本； 2)、取尿液样本在4℃环境下缓慢解冻后，分别取100ul样本后加入400ul预冷甲醇/乙腈溶液(1:1，v/v)，涡旋混合；低温超声处理30min，2次，-20℃静置60min，14000g4℃离心20min，取上清液进行真空干燥，然后将其放入自动进样器中。 4.根据权利要求3所述的尿液中腺苷含量的检测方法，其特征在于，在对所述样本进行质谱分析时加入100μL乙腈水溶液复溶，涡旋，14000g4℃离心15min，取上清液进样分析，所述乙腈和水的体积比为1:1。 5.根据权利要求3所述的尿液中腺苷含量的检测方法，其特征在于，所述代谢产物结构鉴定采用精确质量数匹配(<25ppm)和二级谱图匹配的方式，对XCMS提取得到的数据，删除组内缺失值>50％的离子峰。 6.一种尿液中腺苷含量的检测方法在诊断盆腔脱垂中的应用。
所属类别：	发明专利