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原文传递一种检测牛奶中黄曲霉毒素M1的时间分辨免疫定量试纸条

专利名称：	一种检测牛奶中黄曲霉毒素M1的时间分辨免疫定量试纸条
摘要：	本发明公开了一种检测牛奶中黄曲霉毒素M1的时间分辨免疫定量试纸条，属于时间分辨免疫分析快速检测技术领域。本发明利用竞争免疫法，通过读取荧光定量免疫分析仪上T线的荧光值，即时定量检测分析牛奶样品中的黄曲霉毒素M1。本发明还提供了一种应用上述试纸条检测乳及乳制品等样品前处理的方法，以期降低基质效应。本发明试纸条检测黄曲霉毒素毒素M1的方法简单快速，稳定可靠且灵敏度高，适合大量样本的的筛查和现场监控，具有良好的商业化应用前景。
专利类型：	发明专利
申请人：	江南大学
发明人：	孙秀兰;李淼;孙嘉笛;王海鸣;纪剑;张银志
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T10:00:00+0805
申请号：	CN201911388692.0
公开号：	CN110988339A
代理机构：	哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司
代理人：	仇钰莹
分类号：	G01N33/558;G01N33/577;G01N33/533;G01N33/543;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/558;G01N33/577;G01N33/533;G01N33/543
申请人地址：	214000 江苏省无锡市滨湖区蠡湖大道1800号
主权项：	1.一种检测黄曲霉毒素M1的时间分辨免疫层析定量试纸条，其特征在于，所述时间分辨免疫层析定量试纸条包括样品垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，所述硝酸纤维素膜上设有检测线和质控线，所述检测线上包被黄曲霉毒素M1完全抗原，所述质控线上包被羊抗鼠二抗。 2.如权利要求1所述的时间分辨免疫层析定量试纸条，其特征在于，所述黄曲霉毒素M1的检测浓度为0.05-2ng/mL。 3.如权利要求1或2所述的时间分辨免疫层析定量试纸条，其特征在于，所述黄曲霉毒素M1完全抗原的用量为0.1-0.8mg/mL，所述羊抗鼠二抗完全抗原的用量为0.1-1mg/mL。 4.如权利要求1所述的时间分辨免疫层析定量试纸条，其特征在于，所述检测线和质控线两线之间相距4-6mm；所述试纸条的宽度为3-5mm。 5.一种检测黄曲霉毒素M1含量的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤： (1)将经Eu3+-荧光微球标记的黄曲霉毒素M1单克隆抗体Eu-AFM1-mAb与黄曲霉毒素M1的标准品混匀，20-30℃孵育使其充分竞争反应，加入到权利要求1-4任一所述时间分辨免疫层析定量试纸条中的样品垫上进行层析，然后测定标准品在检测线和质控线处相应的荧光强度值，分别得到T值和C值；设置阴性对照，即样品中不含有黄曲霉毒素M1，测得荧光强度T0值； (2)取T/T0作为参数，与浓度的对数值建立线性模型，得到黄曲霉毒素M1相应的标准曲线； (3)将经Eu3+-荧光微球标记的黄曲霉毒素M1单克隆抗体Eu-AFM1-mAb与待测样品混匀，20-30℃孵育使其充分竞争反应，加入到权利要求1-4任一所述时间分辨免疫层析定量试纸条中的样品垫上进行层析，然后测定待测样品在检测线和质控线处相应的荧光强度，代入步骤(2)所得的标准曲线，即得待测样品中的黄曲霉毒素M1含量结果。 6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(1)中孵育时间为10-15min。 7.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中Eu3+-荧光微球的粒径为100-300nm，固含量1％-10％。 8.如权利要求5或6所述的方法，其特征在于，Eu-AFM1-mAb制备过程中使用的微球复溶液是含有3％-5％蔗糖，0.5％-1％牛血清白蛋白，0.5％-1％Tween-20的pH6.0-7.0 0.04-0.06M的Tris-HCl溶液。 9.如权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(1)中通过抗体基础保护液保护抗体生物活性，所述抗体基础保护液含3％-5％海藻糖、0.1％-0.3％PVPK-30、0.5％-1％BSA、0.1％-0.3％TritonX-100的pH 6.0-7.0 0.04-0.06M的Tris-HCl溶液。 10.权利要求1-4任一所述时间分辨免疫层析定量试纸条在食品检测领域的应用。
所属类别：	发明专利